Wyraźne populacje progenitorowe w mięśniach szkieletowych są pochodnymi szpiku kostnego i wykazują różne losy komórek podczas regeneracji naczyń

Naczyniowi pierwotniacze byli wcześniej izolowani z krwi i szpiku kostnego; w niniejszym dokumencie definiujemy obecność, fenotyp, potencjał i pochodzenie przodków naczyniowych znajdujących się w dorosłym mięśniu szkieletowym. Dwie odrębne populacje komórek zostały jednocześnie wyizolowane z mięśnia tylnego kończyn: populację boczną (SP) wysoce oczyszczonych hematopoetycznych komórek macierzystych i komórek spoza SP, które nie odtwarzają krwi. Stwierdzono, że komórki mięśniowe SP pochodzą z komórek SP szpiku kostnego i uzupełniają je; jednak w obrębie mięśnia były one fenotypowo różne od komórek SP szpiku. Komórki spoza SP również pochodziły z komórek macierzystych szpiku i zawierały progenitory o fenotypie mezenchymalnym. Mięśnie SP i komórki spoza SP izolowano od myszy Rosa26 i bezpośrednio wstrzykiwano do uszkodzonego mięśnia genetycznie dopasowanych biorców. Komórki SP wszczepiono do śródbłonka podczas regeneracji naczyń, a komórki spoza SP wszczepiono do mięśni gładkich. Tak więc, różne populacje progenitorów naczyniowych znajdują się w mięśniu szkieletowym, pochodzą ze szpiku kostnego i wykazują różne losy komórek podczas regeneracji naczyń wywołanej uszkodzeniem. Wstęp Uważa się, że neowaskularyzacja postnatalna, w odpowiedzi na uszkodzenie tkanki i przebudowę, występowała wcześniej jedynie w wyniku proliferacji i migracji komórek śródbłonka z wcześniej istniejącego układu naczyniowego. Jednakże ostatnie badania sugerują, że progenitory naczyniowe znajdujące się w krwi obwodowej (1, 2) i szpiku kostnym (3-6) znacząco przyczyniają się do indukowanej urazem (4. 6) i indukowanej patologią (7) neowaskularyzacji. Naszym celem było ustalenie, czy prekursory naczyniowe znajdują się w tkankach dorosłych innych niż szpik kostny iw jakim stopniu przyczyniają się do swoistej tkankowo, wywołanej urazem regeneracji naczyń. Skupiliśmy się na określeniu potencjału naczyniowego komórek macierzystych znajdujących się w dojrzałym mięśniu szkieletowym, które byłyby łatwo dostępne dla autologicznych terapii komórkowych i zastosowań inżynierii tkankowej (8). Wykazano, że komórki pochodzące z mięśni wykazują różne funkcje komórek macierzystych, w tym regenerację uszkodzonych włókien mięśniowych (9), a także rekonstytucję linii komórek krwiotwórczych po transplantacji szpiku (10, 11). W ostatnich badaniach frakcjonowaliśmy pod względem frakcyjnym komórki pochodzące z mięśni szkieletowych, poddawaliśmy zdysocjowanym komórkom barwienie barwnikiem Hoechst 33342 i FACS i izolowaliśmy populację komórek znanych jako populacja boczna. lub komórki SP, które aktywnie usuwają barwnik Hoechst. Po przeszczepie szpiku kostnego znakowanych mięśniowo komórek SP do śmiertelnie napromienionych biorców, ustaliliśmy, że potencjał krwiotwórczy mięśni szkieletowych mieści się w populacji SP (S. McKinney-Freeman i in., Manuskrypt przedłożony do publikacji). Wykazaliśmy wcześniej, że komórki SP pochodzące ze szpiku kostnego przyczyniają się do regeneracji śródbłonka naczyniowego podczas neowaskularyzacji wywołanej uszkodzeniem (4), poza odtwarzaniem krwi (12); w związku z tym postawiliśmy hipotezę, że komórki SP pochodzące z mięśni mają podobny potencjał naczyniowy. Naszym celem było również ustalenie, czy inne. Non-SP. komórki w mięśniu mogą służyć jako prekursory naczyniowe. Komórki spoza SP nie powodują odpływu barwnika Hoechst tak wydajnie jak komórki SP, a po analizie FACS pojawiają się jako odrębna populacja komórek sąsiadujących z populacją SP. Pochodzące z mięśni komórki inne niż SP nie mają potencjału do odtworzenia krwi u śmiertelnie napromienionych biorców przeszczepu szpiku kostnego (S. McKinney-Freeman i in., Manuskrypt przedłożony do publikacji). W przedstawionych tu badaniach określiliśmy fenotyp komórek SP i nie-SP w obrębie tkanki mięśniowej, w stosunku do znanych cech zarodkowych prekursorów naczyniowych, jak również fenotyp szpiku SP szpiku, co odkryliśmy tych populacji mięśni. Następnie zbadaliśmy ich potencjał do regeneracji śródbłonka naczyniowego i mięśni gładkich poprzez bezpośrednie wstrzyknięcie do uszkodzonej tkanki mięśniowej. Stwierdziliśmy, że te dwie fenotypowo różne populacje komórek macierzystych znajdujących się w mięśniu szkieletowym w różny sposób przyczyniły się do regeneracji naczyń w odpowiedzi na uraz: komórki SP pochodzące z mięśni dały początek śródbłonkowi naczyniowemu, a komórki spoza SP regenerowały mięsień gładki naczyń podczas indukowanej urazem neowaskularyzacji mięśni szkieletowych. Metody Izolacja progenitorów mięśni szkieletowych. Komórki mięśni szkieletowych izolowano z 6- do 8-tygodniowych myszy C57Bl / 6, C57Bl / 6, Rosa26 lub FVB / N-TgN (Tie-2LacZ) (The Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine, USA). Mięśnie mięśni szkieletowych Hindllb wycięto, rozdrobniono i strawiono przez 30 minut w 37 ° C kolagenazą typu II (0,2%; Worthington Biochemical Corp., Lakewood, New Jersey, USA)
[patrz też: filet z łososia na patelni, żel do mycia twarzy bioliq, mały weterynarz ]
[patrz też: damar ruda śląska, aceklofenak, otifree ]