Wyraźne populacje progenitorowe w mięśniach szkieletowych są pochodnymi szpiku kostnego i wykazują różne losy komórek podczas regeneracji naczyń ad 6

Połączenie wzorów barwienia a-gal i ICAM-2 ujawnia kolokalizację (żółty kolor) w strukturach naczyń. Liczba struktur naczyń ICAM-2P pozytywnych, które były również pozytywne dla y-galu u każdego z czterech zwierząt wynosiła: 25 z 1014, 39 z 768, 31 z 646 i 18 z 424 struktur naczyń, odpowiednio. Zatem średnia proporcja naczyń w mięśniu TA, które wykazywały komórki śródbłonka pochodzące z SP wyniosła 4,2%. 1,0%. U tych samych zwierząt, wszczepienie zaznaczonych komórek macierzystych nie zostało wykryte w strukturach naczyń w nieuszkodzonych mięśniach kończyn dolnych. Ponadto, żadna z komórek (3-GIF-dodatnich nie była kolokalizowana ze despirem markera mięśni gładkich (0/2300 struktur naczyń badanych między czterema zwierzętami) w dowolnym obszarze mięśni; w ten sposób komórki SP nie wcielają się w warstwę mięśni gładkich naczyń w tych tkankach. Figura 5 Komórki SP pochodzące z mięśni szkieletowych przenikają do śródbłonka naczyniowego. Sześcio- do ośmiotygodniowych myszy C57Bl / 6 znieczulono Avertiną i obydwu mięśniom TA wstrzyknięto 25 ul kardiotoksyn mg / ml. Po 8 lub 24 godzinach prawemu mięśniowi TA kończyny wstrzyknięto 2 000 komórek mięśniowych SP dodatnich dla LacZ, a lewą nogę wstrzyknięto sam HBSS. Po 4 tygodniach zebrano i poddano obróbce mięśnie TA każdego z czterech eksperymentalnych zwierząt w celu wykonania skrobi mrożonej i analizy immunohistochemicznej. Wszystkie skrawki wybarwiono immunologicznie dla P-galu i poddano kosztowi dla ICAM-2 lub desminy, aby wykryć wywołane przez uraz wszczepienie komórek SP LacZ-dodatnich do odpowiednio regenerowanego śródbłonka naczyniowego i mięśni gładkich. ekspresję g-. w strukturach naczyniowych kolokalizowano tylko przy jasnym polu ICAM-2: (aib), w skrzynkach zaznaczono naczynia o zmienionej wartości; (c i d) (3-immunohistochemia; (e oraz f) immunohistochemia ICAM-2; (g i h) obrazy fluorescencyjne y-gal i ICAM-2 połączono w celu ujawnienia obszarów kosztownych, o czym świadczy żółty wzór barwienia. Powiększenie, × 400 (a, c, e, g); × 1,000 (b, d, f, h, i wstawki w polach c, e oraz g). Odwrotnie, komórki G-dodatnie, pochodzące od mięśni, nie pochodzące z SP, wykazywały wszczepianie się w warstwę mięśni gładkich naczyń dużych (fig. 6, a-f) i naczyń małego kalibru (fig. 6, g. J), i obcinano za pomocą desygnat markera mięśni gładkich (ryc. 6, e i i). Połączenie wzorców barwienia a-gal i desminy ujawnia kolokalizację (żółty kolor) w strukturach naczyń (fig. 6, f oraz j). Ogólnie, całkowita liczba komórek mięśni gładkich, zidentyfikowanych przez barwienie desmin-dodatnie, była mniejsza niż liczba możliwych do zidentyfikowania komórek śródbłonka w tych sekcjach tkanki mięśniowej. W związku z tym liczba struktur naczyń policzalnych jest jednocześnie mniejsza w tych doświadczeniach, w porównaniu do tych opisanych powyżej. Spośród czterech zwierząt doświadczalnych, liczba struktur naczyń pozytywnych dla desminy, które również były pozytywne dla a-galu, wynosiła 59 z 567, lub 10,3%. 4,4% wszczepienia. Nie znaleziono żadnych (3-galA-dodatnich komórek spoza SP w warstwie śródbłonka ICAM-2 . struktur naczyniowych (0/875); w ten sposób komórki spoza SP nie wcielały się w śródbłonek naczyniowy. Nie znaleźliśmy żadnych (3-gal-dodatnich komórek w mięśniu szkieletowym lub naczyniach (0/2000 struktur naczyń) zwierząt leczonych pozornie. Ryc. 6 Komórki spoza SP pochodzące z mięśni szkieletowych wszczepiają się w mięsień gładki naczyń. Myszy C57B1 / 6 w wieku od sześciu do ośmiu tygodni znieczulano za pomocą Avertiny i obydwu mięśniom TA wstrzykiwano 25 ul kardiotoksyn mg / ml. Po 8 lub 24 godzinach mięśnie TA prawej kończyny prawej wstrzyknięto 500 000 komórek LacZ-pozytywnych nie-SP, a lewą nogę wstrzyknięto sam HBSS. Po 4 tygodniach zebrano i poddano obróbce mięśnie TA każdego z czterech eksperymentalnych zwierząt w celu wykonania skrobi mrożonej i analizy immunohistochemicznej. Wszystkie skrawki wybarwiono immunologicznie dla a-galu i poddano kosztowi dla ICAM-2 lub desminy, aby wykryć wywołane przez uszkodzenie wszczepienie komórek LacZ-dodatnich spoza SP odpowiednio do regenerowanego śródbłonka naczyniowego i mięśni gładkich. (3-ekspresja galu w strukturach naczyniowych połączonych tylko z desmin: (a, b, i g) jasnym polem, ramka w a wskazuje region pokazany w (b. f); (c) DAPI; (d i h) y-immunohistochemia; (ei) desmina immunohistochemiczna; (f i j) połączone ze sobą fluorescencyjne obrazy fuzyjne i desminy ujawniły obszary kosztujące, o czym świadczy żółty wzór barwienia. Powiększenie, × 200 (a); × 600 (b, c, d, e i f); × 1,000 (g, h, i i j). Dyskusja W tych badaniach chcieliśmy ustalić, czy prekursory naczyniowe znajdują się w dojrzałym mięśniu szkieletowym, czy pochodzą od komórek progenitorowych szpiku kostnego, oraz w jakim stopniu przyczyniają się do regeneracji naczyń wywołanej uszkodzeniem mięśni. Z mięśni szkieletowych wyizolowaliśmy wysoko oczyszczoną populację hematopoetycznych komórek macierzystych, komórek SP, a także populację komórek spoza SP, która nie odtwarza krwi i zawiera mezenchymalne komórki progenitorowe (15)
[podobne: tabcin ulotka, moczówka prosta u psa, najśmieszniejsze nazwiska w polsce ]
[przypisy: laremid ulotka, disnemar xylo, tabcin ulotka ]