Wyraźne populacje progenitorowe w mięśniach szkieletowych są pochodnymi szpiku kostnego i wykazują różne losy komórek podczas regeneracji naczyń ad 5

Flk-1 i kadheryna VE nie były wykrywalne w żadnej z populacji; CD34 był wykrywalny tylko w populacji spoza SP i wyrażany na niskim poziomie (10. 15%). Analiza cytospiny ujawniła ekspresję PDGFR-a i SM – y – aktynę, ale nie kalponinę lub desminę, białka w komórkach niebędących SP; Komórki SP nie wykazywały ekspresji żadnego z tych białek. Dane dotyczące ekspresji RNA i białka dla komórek SP SP i nie-SP, a także wcześniej opublikowane dane ekspresji z komórek SP szpiku kostnego (4, 12), zestawiono w Tabeli 1. Figura 3 Analiza FACS dla markerów linii naczyniowych w mięśniu SP i nie -SP populacje. Dane FACS zostały zebrane z czterech eksperymentów, a ekspresja konkretnych białek została przedstawiona jako średnia. SD z tych niezależnych eksperymentów są pokazane: (a) CD45; (b) Tie-2, o czym świadczy cięcie FDG, wskazujące na aktywność g-genu kierowaną z promotora Tie-2; (c) Sca-1; i (d) PE-CAM-1. Tabela Podsumowanie analiz FACS i RT-PCR Proteiny wstępne rezydujące w mięśniach szkieletowych pochodzą ze szpiku kostnego. Ponieważ komórki SP ze szpiku kostnego i mięśni szkieletowych były fenotypowo odrębne, chcieliśmy ustalić, czy komórki SP mięśni zostały uzyskane ze szpiku kostnego i czy dotyczą one środowiska naczyniowego wpływającego na ich potencjał naczyniowy. W związku z tym przeszczepiliśmy śmiertelnie napromienionych biorców komórek SP szpiku kostnego pochodzących z Rosa26. Po 5 lub 12 miesiącach tkanka mięśniowa szkieletu została wycięta, strawiona i poddana gradientowi 40-70% Percoll. Komórki mięśniowe frakcjonowane pod mikroskopem barwiono następnie barwnikiem Hoechst i ładowano FDG, aby wyizolować komórki SP i SP spoza stabilnie wszczepionych myszy i wykryć aktywność g-galu (ekspresja LacZ) w obrębie każdej populacji, odpowiednio. Stwierdzono, że zarówno populacje mięśni SP, jak i spoza SP pochodzą głównie z komórek SP szpiku kostnego, o czym świadczy ich aktywność (3-galu (Figura 4). Ponadto odsetek komórek pochodzących ze szpiku kostnego w tych populacjach mięśni szkieletowych znacznie wzrastał z czasem. Po 5 miesiącach po transplantacji (Figura 4a), średnia liczba komórek SP i nie-SP pochodzących od komórek SP szpiku dodatniego dla LacZ, wśród trzech myszy, wynosiła 39,0%. 16,4% i 10,6%. 1,9%. W 12 miesięcy po transplantacji (Figura 4b), 89,4%. 8,2% komórek SP i 87,5%. 5,2% komórek spoza SP było pozytywnych dla LacZ, a zatem pochodziło z wszczepionych komórek SP szpiku kostnego dodatnich dla LacZ. Spośród około 90% komórek spoza SP LacZ-dodatnich znalezionych w tkance mięśniowej 12 miesięcy po transplantacji, 22,5%. 3,2% było negatywnych pod względem CD45. Rycina 4. Niekomórkowe progenitory w mięśniu szkieletowym pochodzą ze szpiku kostnego. Komórki SP wyizolowano ze szpiku kostnego myszy Rosa26 i trwale wszczepiono do napromieniowanych, obdarzonych śmiertelnie, genetycznie dopasowanych biorców. Po 5 lub 12 miesiącach mięśnie kończyn tylnych wycięto i zbadano na obecność prekursorów naczyniowych LacZ-dodatnich. Komórki mięśniowe frakcjonowane pod mikroskopem barwiono barwnikiem Hoechst i obciążano FDG, następnie poddawano FACS w celu wyizolowania populacji SP i SP spoza SP i określenia, czy wykazują one aktywność g-galu. (a) Średnia. SD komórek LacZ-dodatnich SP i nie-SP wśród trzech myszy po 5 miesiącach po przeszczepie wyniosło 39,0%. 16,4% i 10,6%. 1,9%. (b) W 12 miesięcy po transplantacji średnia. SD komórek LacZ-dodatnich SP i nie-SP wśród trzech myszy wynosiło 89,4%. 8,2% i 87,5%. 5,2%, odpowiednio. Pochodzące z mięśni komórki progenitorowe w różnym stopniu przyczyniają się do regeneracji śródbłonka naczyniowego i mięśni gładkich. Aby przetestować potencjał naczyniowy komórek SP pochodzących z mięśni szkieletowych i komórek spoza SP, genetycznie zaznaczone komórki (LacZ-dodatnie) wstrzyknięto do mięśni szkieletowych poddawanych neowaskularyzacji wywołanej uszkodzeniem. Cztery tygodnie po uszkodzeniu mięśnia TA, dolną muskulaturę kończyny tylnej zebrano i przeszczepiono komórki macierzyste, stosując techniki immunohistochemiczne. Barwienie histologiczne ujawniło uszkodzenie mięśni, o czym świadczyła niewspółosiowość włókien mięśniowych i nadmierne odstępy między włóknami na całej długości mięśnia TA, zgodnie z oczekiwaniami, biorąc pod uwagę, że kardiotoksynę wstrzykiwano podłużnie; około 50% powierzchni tkanki na przekroju wykazało objawy urazu. Dokładna granica uszkodzonego regionu nie zawsze mogła być jasno określona; dlatego kwantyfikacja wszczepienia komórek macierzystych była oparta na całkowitej liczbie naczyń w całym mięśniu TA. Tak więc, podane tu poziomy zaszczepienia mogą nie odzwierciedlać wkładu komórek macierzystych w neowaskularyzację w najszerzej uszkodzonej tkance mięśniowej. Stwierdziliśmy, że komórki SP pochodzące z mięśni wprowadzono do śródbłonka naczyń małego kalibru (Figura 5, aib), co ujawniono przez koekspresję y-gal (Figura 5, c i d) i marker śródbłonkowy ICAM-2 (Figura 5, e i f)
[podobne: tormed lubliniec, masc ochronna z wit a, rozpiska ćwiczeń na siłowni ]
[więcej w: siódmy syn chomikuj, masc ochronna z wit a, tormed lubliniec ]