Transportery ABC i NR4A1 identyfikują spoczynkowy podzbiór komórek T pamięci rezydujących w tkankach cd

Wzbogacenie komórek Tsp zostało również udokumentowane w komórkach T gp33-tetramer + w jelitach, a większość komórek Tsp będących rezydentami w żołądku zostało wzbogaconych o fenotyp Trm (CD69 + CD103 +) (Figura 2, C i RE). Zgodnie z tym odkryciem zaobserwowaliśmy również podobne wzbogacenie komórek T CD8 + w komórki Trm ludzkiego jelita (Supplemental Figure 2D). Podsumowując, dane te pokazują, że specyficzne wobec antygenu mysie limfocyty CD8 + Tsp ujawniają się na wczesnym etapie odpowiedzi immunologicznej i stopniowo akumulują się w tkankach błony śluzowej wzbogaconej o fenotyp Trm. Figura 2SP – fenotyp oznacza specyficzne dla LCMV komórki CD8 + Trm. (A) Reprezentatywna analiza łysinek CD8 + na śledzionie myszy zainfekowanej LCMV-Arm i IEL w dniu 8 (po lewej) i po 30 (po prawej). pi, po infekcji. (B) Wykres przedstawiający analizę w A (n = 4 myszy). Eksperyment powtórzono dwukrotnie; wykres tutaj przedstawia jeden z eksperymentów. (C) Górny panel pokazuje procent komórek T CD8 + i NSP gp33 + CD8 + w dniu 35 po zakażeniu w różnych narządach. Panel dolny jest bramkowany na komórkach Tsp komórek Gp33 + CD8 +. (D) Procent komórek gp33 + Trm w cząstkach CD8 + Tsp i NSP. Wykresy słupkowe przedstawiają dane od 7. 10 myszy. Dane zostały zestawione z 3 niezależnych eksperymentów. * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001, według testu ucznia. Wolnoobrotowy fenotyp ludzkich i mysich komórek Tsp. W celu upewnienia się, czy komórki Tsp reprezentują funkcjonalnie odrębny podzbiór ludzkich / mysich komórek T, porównaliśmy ich stan cyklu komórkowego z odpowiednikami NSP. Komórki fenotypowe SP w HSC i dorosłe tkanki macierzyste komórki są scharakteryzowane jako będące w stanie nieużywania (faza G0) cyklu komórkowego (24). Prawie wszystkie komórki T CD4 + i CD8 + w ludzkich PBMC zostały wzbogacone w fazę G0 cyklu komórkowego w porównaniu z komórkami NSP opartymi na barwieniu Hoechst i Pyronin Y (Figura 3, A i B). Podobnie jak w krążących ludzkich komórkach Tsp, te w BM były również przeważnie w stadium G0 cyklu komórkowego (dane nie pokazane). Co ważne, podtypy CD8 + podzbiorów Trm z ludzkiego jelita i skóry również zostały wzbogacone w fazę G0 cyklu komórkowego w porównaniu z komórkami Trm CD8 + NSP w tych tkankach (Figura 3, A i B). Ten niskokaloryczny fenotyp komórek Tsp obserwowano również w mysich komórkach Trm. W 35 dniu po zakażeniu LCMV prawie wszystkie komórki tetrameru GP33-tetramer + CD8 + z fenotypem Tsp w PP, IEL i LPL były w G0, podczas gdy odpowiedniki NSP były w obu fazach G0 i G1 cyklu komórkowego (Figura 3C). Figura 3 Analiza cyklu komórkowego komórek Tsp. (A) Analiza cyklu komórkowego Hoechst-Pyronin Y na części Tsp i NSP z limfocytów T CD8 + ludzkiej krwi (górny panel), IEL (środkowy panel) i skóry komórek CD8 + Trm (dolny panel). Wynik jest reprezentatywny dla 3 niezależnych eksperymentów. (B) Wykres słupkowy przedstawia połączone dane z 3 niezależnych eksperymentów. (C) Wykres słupkowy przedstawia procent frakcji G0 i G1 w CD8 + Tsp i NSP bramkowanych na przedziale Trm z PP, IEL u myszy w dniu 35 (pi) z ramieniem LCMV. (D) Schemat ideowy przedstawiający protokół do pomiaru zatrzymywania znaczników GFP u myszy H2B-GFP po zakażeniu ramieniem LCMV. (E) Analiza FACS na limfocytach T pamięci CD8 + z BM, śledziony, wątroby, IEL i PP po 5 tygodniach pościgu; to samo zostało udokumentowane na wykresie słupkowym (n = 4 × 5 myszy). (F) Analiza FACS zatrzymywania znacznika GFP w przedziale SP8 i NSP CD8 + Trm w 5 tygodniu pościgu u myszy H2F GFP zakażonych ramieniem LCMV. (G) Wykres przedstawia wartości procentowe komórek GFP + w komórkach Trm CD8 + SP i NSP. * P <0,05. Eksperymenty z myszami powtórzono dwukrotnie; wykresy przedstawiają analizę z eksperymentu (n = 4 myszy). Barwienie metodą Pyroniny Y stanowi tylko migawkę statusu rowerowego. Zatrzymywanie etykiet w indukowalnych doksycykliną (indukowalnych Dox) histonach Myszy GFP H2B wykorzystano do identyfikacji spoczynkowych / wolnoobrotowych populacji komórek macierzystych w tkankach dorosłych (25, 26), ale według naszej wiedzy, jeszcze nie porównywalne do oceny przedziału spoczynkowego limfocytów T pamięci myszy in vivo. Myszy karmione Dox przez 2 tygodnie infekowano LCMV w obecności Dox przez okres do 6 tygodni po zakażeniu, a następnie przeprowadzano 5-tygodniowy pościg przez usunięcie leczenia Dox (Figura 3D). Jednolite znakowanie limfocytów T CD8 + eksprymujących GFP przed pościgiem weryfikowano za pomocą cytometrii przepływowej (Suplemental Fig. 3A). Ta strategia ujawniła, że większość komórek T CD8 + z pamięcią limfatyczną w śledzionie, wątrobie lub BM uległo cyklom i są GFP. z bardzo małą liczbą znaczników GFP utrzymujących limfocyty T CD8 + (Figura 3E). Przeciwnie, komórki T pamięci CD8 + zatrzymujące znacznik można wykryć w PP i IEL (Figura 3E). Ponadto, zgodnie z oczekiwaniami, wyższy procent komórek zatrzymujących znacznik GFP znaleziono w komórkach macierzystych i progenitorowych c-Kit + w BM, jak również w naiwnych komórkach T CD8 + w śledzionie (Suplementowa Figura 3B). [hasła pokrewne: przeglądarka skierowań sanatoryjnych nfz, trosicam 15 mg, przerost mięśnia sercowego ] [podobne: trosicam 15 mg, najsmieszniejsze nazwiska, pro kolin ]