Transportery ABC i NR4A1 identyfikują spoczynkowy podzbiór komórek T pamięci rezydujących w tkankach ad

Tutaj pokazujemy, że fenotyp SP oznacza odrębną podgrupę ludzkich i mysich limfocytów T. Komórki Trm w tkankach ludzkich i mysich, takich jak jelito, są wysoce wzbogaconymi komórkami T SP (komórki Tsp), a te komórki szczególnie znaczą podzbiór Trm z fenotypem spokojnego / wolnego cyklu. Ludzkie komórki Tsp dzielą nakładające się programy ekspresji genów transkrypcji z komórkami Trm (10), w tym kilkoma członkami rodzinnej receptora jądrowego NR4A, również zaangażowanymi w wyciszanie HSC (22, 23). Pokazujemy również, że 2 kluczowe geny podpisów zidentyfikowane w ludzkich komórkach Tsp, transporterach ABC i podrodzinie receptora jądrowego 4 członie grupy A (NR4A1), wpływają na biologię komórek Trm. Wykorzystanie właściwości komórek Tsp może zatem umożliwiać manipulowanie pamięcią przebywającą w tkankach u ludzi. Ich uspokojenie, skłonność do lokalizacji tkanek i możliwość mobilizacji do krążenia także czynią ich atrakcyjnymi kandydatami do adopcyjnych terapii komórkowych ukierunkowanych na raka. Wyniki Wykrywanie ludzkich komórek Tsp. W celu wykrycia ludzkich komórek Tsp, świeżo izolowane ludzkie komórki T z krwi, BM, jelit i skóry analizowano pod kątem zdolności do usuwania barwnika Hoechst. Wcześniejsze leczenie werapamilem zapobiegło wypływowi barwnika i zastosowano go jako kontrolę. Komórki Tsp można było zidentyfikować w krążących limfocytach T, ale wykryto je z dużo większą częstotliwością w BM, nabłonku jelitowym i skórze (Figura 1, A i B). Odsetek komórek T CD4 + CD8 + o fenotypie naiwności / pamięci w krwi, BM, skórze i limfocytach nabłonka jelitowego (IEL) był podobny jak w komórkach bez populacji (NSP) (Figura 1C i Suplementowa Figura 1, A. D ; materiał uzupełniający dostępny online z tym artykułem; doi: 10.1172 / JCI85329DS1). Sekwencjonowanie oczyszczonych komórek Tsp receptora komórek T (TCR) udowodniło obecność różnych repertuarów w przeciwieństwie do komórek MAIT z ograniczonymi TCR (Figura 1D). Obecność fenotypu Tsp wykryto również w komórkach T pamięci specyficznej dla peptydu ludzkiej grypy-macierzy (Fig. 1E). Prawie wszystkie komórki Tsp w jelicie były CD69 + CD103 +, zgodne z fenotypami komórek Trm T (Figura 1F). Podobne wzbogacenie CD69 + CCR7. Komórek Trm nie obserwowano w komórkach Tsp CD8 + skóry (Figura 1G). W przeciwieństwie do komórek T w tkankach tylko niewielka część komórek T w ludzkich jednojądrzastych komórkach krwi obwodowej (PBMC) wykazuje ekspresję CD69. Co ciekawe, te krążące ludzkie komórki T CD69 + są wzbogacone w komórki Tsp i mają fenotyp CCR7. CD62L. CD45RO + CD45RA. Komórki T IL7Rlo (Figura 1H). Podsumowując, wyniki te pokazują, że ludzkie komórki Tsp mają zróżnicowany fenotyp i mogą być wykrywane w kilku tkankach, ale są szczególnie wzbogacone w komórki Trm w tkankach, takich jak jelito. Figura 1Zasobów komórek Tsp w tkankach ludzkich z fenotypem Trm. (A) Analiza FACS komórek Tsp wypierających barwnik Hoechst z krwi ludzkiej, BM, IEL i skóry (prawy panel), z inhibitorem SP werapamilem (lewy panel). (B) Wykres słupkowy przedstawia częstość komórek Tsp z krwi, BM, IEL i skóry. (C) Wykres przedstawia podzbiory CD4 + CD8 + w komórkach Tsp z krwi (n = 20), BM (n = 7), IEL (n = 6) i skóry (n = 4). (D) Wykres kołowy reprezentuje V. repertuar w komórkach T CD8 + Tsp i MAIT CD8 +. (E) Analiza FACS dokumentująca komórki ludzkiego wirusa grypy HLA A * 0201-Tetramer + (po lewej) i frakcję SP na komórkach T Tet + CD8 + wirusa grypy. (F) Reprezentatywny wykres FACS bramkowany na komórkach CD8 + Tsp i NSP z IEL (reprezentatywny dla 6 niezależnych doświadczeń); to samo jest wykreślane na wykresie słupkowym. (G) Analiza FACS na komórkach CD8 + Tsp i NSP ze skóry; wykres słupkowy przedstawia zebrane dane z 4 niezależnych próbek skóry. (H) Analiza FACS na komórkach NSP z krwią, które są bramkowane na komórkach T CD45RO + CD62LP CCR7a CD8 +; wykres słupkowy reprezentuje skompilowane dane (n = 6). * P <0,05, *** P <0,001, według testu ucznia. Wzbogacenie fenotypu Trm w mysich komórkach Tsp. Następnie oceniliśmy generację i lokalizację tkankową mysich komórek TPS z pamięcią CD8 + przy użyciu modelu infekcji limfocytarnym wiriomensitis (LCMV). Komórki T th1.1 + P14 + CD8 + przeniesiono do nieczynnych myszy C57BL / 6 (B6) i analizowano w różnych punktach czasowych po zakażeniu LCMV. Tsp CD8 + komórki T początkowo wykryto w tkankach limfoidalnych w dniu 8 po infekcji, ale odmówiono do dnia 30 (dodatkowa Figura 2A). Przeciwnie, wzbogacenie komórek Tsp wykryto w BM do 60 dni po zakażeniu (dodatkowa Figura 2A). Szczegółowa analiza tkanek po 30 dniach od zakażenia ujawniła, że komórki Tsp zostały wzbogacone w BM, wątrobę i jelita, ale nie w śledzionę (dodatkowa Figura 2B). Co ciekawe, komórki T14 z P14 + CD8 + były w większości ograniczone do limfocytów T CD69 + w wątrobie i limfocytów T CD69 + CD103 + w łatach Peyera (PP), IEL i limfocytach blaszki właściwej (LPL) (Suplemental Fig. 2C). [więcej w: turnusy rehabilitacyjne krynica zdrój, usg stawów biodrowych u niemowląt kraków, krem ziaja liście manuka ] [podobne: otifree, mały weterynarz, isonasin ]