Transportery ABC i NR4A1 identyfikują spoczynkowy podzbiór komórek T pamięci rezydujących w tkankach ad 7

Transportery ABC są bezpośrednio odpowiedzialni za fenotyp SP i postulowane w celu ochrony komórek macierzystych przed stresem oksydacyjnym i genotoksycznym, chociaż charakter konkretnych substratów może zależeć od konkretnej tkanki (19). Jest prawdopodobne, że te transportery mogą odgrywać podobną rolę również w kontekście komórek T. Może to być szczególnie prawdziwe przy ustawianiu komórek Trm w miejscach zaporowych, takich jak jelita, gdzie mogą być one potrzebne do aktywnego usuwania substratów w celu utrzymywania komórek Trm w jelitach w stanie spoczynku. Rzeczywiście, komórki Trm jelita od myszy z niedoborem transportera miały fenotyp zapalenia. Warto zauważyć, że zwiększony IFN-y wytwarzanie przez komórki T jelitowe u tych myszy było ograniczone tylko do komórek Trm, ale nie do komórek innych niż Trm, zgodnie z wpływem swoistego dla Trm niedoboru transportera. Oprócz transporterów ABC, podstawowa ekspresja genów w komórkach Tsp została również wzbogacona dla rodziny czynników transkrypcyjnych z rodziny NR4A. Te receptory jądrowe działają jako czynniki transkrypcyjne do indukowania lub represji ekspresji genów (29). NR4A1 jest aktywowany jako część wczesnej odpowiedzi, związanej po części z mocą sygnalizacji TCR i zaangażowanej w regulację różnicowania komórek T (28, 36). Ostatnio wykazano, że NR4A1 reguluje ekspansję i funkcje efektorowe mysich komórek efektorowych CD8 + (tak samo jak komórki Tem) poprzez bezpośrednią represję IRF4 (37). Nasze badania sugerują rolę tego czynnika w biologii mysich komórek Trm. Komórki T od Nur77. /. myszy wykazywały zmniejszoną zdolność do generowania komórek Trm, co wskazuje, że ten czynnik transkrypcyjny może być ważny w regulowaniu miejsca powstawania / tkanki komórek Trm. Ta zależność od NR4A1 przypomina sytuację patrolujących monocytów, które eksprymują wszystkie 3 geny NR4A, ale zależą tylko od NR4A1 (38). Adopcyjne przeniesienie genetycznie zmodyfikowanych limfocytów T, zarówno z chimerycznymi receptorami antygenowymi (CAR), jak i przeciwnowotworowymi TCR, staje się obiecującym podejściem terapeutycznym w nowotworach hematologicznych (39, 40). Jednak większość klinicznych sukcesów w przypadku komórek T CAR jest ograniczona do pacjentów z białaczką i istnieje niezaspokojona potrzeba opracowania metod zwiększających trwałość przenoszonych limfocytów T i zwiększających ich zdolność do infiltracji NLT, aby móc celować guzy lite (39). Nasze odkrycia, że ludzkie / mysie komórki Tsp reprezentują spokojną subpopulację limfocytów T, z możliwością wzbogacenia się w tkanki w długim okresie in vivo i zdolność do mobilizacji do krążenia u ludzi, sugerują, że te komórki mogą stanowić atrakcyjną platformę dla immunoterapii, szczególnie w przypadku nowotworów w NLT i BM. Metody Myszy. Myszy C57BL / 6j z Jackson Laboratory i transgeniczne myszy Thy-1.1 + TCR (41), które rozpoznają epitop G-33b H-2Db, zastosowano tam, gdzie to wskazano. Myszy H2B GFP zakupiono w Jackson Laboratory. Myszy ABCB1a / b ABCG2 KO i myszy FVB-N zakupiono od Taconic. Infekcje myszy. W przypadku zakażeń LCMV myszy zakażono ip 2 x 105 PFU LCMV-Armstrong (ramię LCMV). W przypadku zakażeń grypą myszy zaszczepiano wirusem 031 TCV50 rekombinowanego wirusa grypy x31-OVA wyrażającego OVA257-262 (SIINFEEKL). Próbki ludzkie. PBMC od zdrowych dawców wyizolowano z kożuszków leukocytarnych nabytych w New York Blood Center. Komórki T jelitowe uzyskano z niezaalko-wanego jelita u pacjentów poddawanych zabiegom chirurgicznym w kierunku choroby uchyłkowej lub biopsji jelit. Aspiraty BM otrzymano od pacjentów z rakiem poddawanych diagnostycznym biopsjom BM. U niektórych pacjentów próbki krwi pobierano przed i po protokole mobilizacji komórek macierzystych za pomocą pleryksaforu. Izolacja komórek T jelit i skóry. PP najpierw wyizolowano, a następnie izolowano IEL i LPL. Po usunięciu PP jelita cięto wzdłużnie, a zawartość jelit wraz ze śluzem usuwano przez delikatne skrobanie. Jelita następnie pocięto na małe kawałki i inkubowano w buforze PBS zawierającym mM EDTA, mM DTT i 5% FBS w 37 ° C w inkubatorze-wytrząsarce przy 28 g przez 15 minut. Supernatant zebrano w celu wyizolowania IEL, podczas gdy pozostałe fragmenty jelitowe inkubowano dalej w LPL / kolagenazie (1 mg / ml) / DNazie (1 U / ml) w roztworze PBS w 37 ° C w inkubatorze-wytrząsarce przez 10 minut. do izolacji LPL. Komórki T skóry uzyskano z ludzkiej skóry, stosując metody opisane wcześniej (42). Cytometrii przepływowej. Zawiesiny pojedynczych komórek wytworzono z tkanek ludzkich i mysich. Barwienie FACS na powierzchni komórki przeprowadzono w buforze FACS (PBS + 2% FBS) przez inkubowanie komórek ze skoniugowanymi z fluorochromem przeciwciałami przez 30 minut na lodzie w ciemności. Po barwieniu komórki przemywano buforem FACS i analizowano za pomocą BD LSRII
[przypisy: koktajl spalający tłuszcz, tabcin ulotka, kolmed międzylesie ]
[więcej w: tabcin ulotka, chitinin extra, kolmed międzylesie ]