Transportery ABC i NR4A1 identyfikują spoczynkowy podzbiór komórek T pamięci rezydujących w tkankach ad 5

Eksperymenty powtórzono dwukrotnie u 3 do 4 myszy w każdej grupie; wykresy przedstawiają dane z niezależnego eksperymentu (n = 4 myszy). * P <0,05, według testu ucznia. Zmiany w komórkach Trm przewodu pokarmowego u myszy z niedoborem transportera ABC. Ponieważ fenotyp łodygi zależy głównie od ekspresji członków rodziny transporterów ABC, wykorzystaliśmy Abcb1a. /. Abcb1b. /. Abcg2. /. myszy (tutaj określane jako ABCB1a / b myszy ABCG2 KO) w celu oceny roli tych transporterów w biologii Trm. Ponieważ wyłączenie barwnika Hoechst zależy od tych transporterów, fenotypu łodygi nie można wykryć u tych myszy. Postawiliśmy hipotezę, że brak transporterów może jednak zmienić homeostazę / funkcję komórek Trm. Zaobserwowaliśmy znaczny wzrost liczby komórek Trp CD4 +, CD4 + CD8 + i CD8 + w PP i IEL u myszy ABCB1a / b ABCG2 KO w porównaniu z myszami WT, podczas gdy liczba komórek T w śledzionie była porównywalna (Figura 6A i dodatkowa Figura 6). , A i B). Jak oczekiwano, komórki Trm w IEL i wątrobie myszy ABCB1a / b ABCG2 KO nie miały fenotypu SP (dodatkowa Figura 6, C i D). Aby lepiej zrozumieć różnice we właściwościach funkcjonalnych tych komórek T, porównaliśmy IFN-y produkcja w komórkach Trl IEL tych myszy. Świeżo wyizolowane komórki Trm CD4 + i CD8 + IEL (ale nie komórki krwi i śledziony) od myszy z niedoborem transportera wytwarzały znacznie więcej IFN-y. niż myszy WT (Figura 6, B i C, i dodatkowa Figura 6E). Co ciekawe, zwiększony IFN-y wytwarzanie w IEL myszy z niedoborem transportera było ograniczone do komórek CD69 + CD103 + i nie obserwowano w komórkach CD69 + CD103- (Figura 6, B i C). Łącznie dane te pokazują, że transportery ABC mogą regulować homeostazę i funkcjonalne właściwości komórek Trm w jelitach. Figura 6ABCB1a / b Myszy ABCG2 KO wykazują zwiększoną zapalną komorę Trm. (A) Wykres słupkowy porównujący przedziały CD4 +, CD4 + CD8 + i CD8 + Trm w jelitach (PP, IEL i LPL) myszy WT i ABCB1a / b ABCG2 KO. (B) cytometria przepływowa cytokiny wewnątrzkomórkowej dokumentująca IFN-y wytwarzanie na PMA z aktywacją jonomycyny myszy IEL typu WT i ABCB1a / b ABCG2 KO. (C) Wykres słupkowy przedstawia IFN-y produkcja w różnych populacjach komórek T od myszy WT i ABCB1a / b ABCG2 KO. Eksperymenty powtórzono dwukrotnie u 3 do 4 myszy w każdej grupie; wykresy przedstawiają dane z eksperymentu (n = 4 myszy). * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001, według testu ucznia. Mobilizacja i adopcyjny transfer komórek Tsp in vivo. Adopcyjne przeniesienie limfocytów T stało się obiecującą strategią terapeutyczną przeciwko rakowi ludzkiemu, chociaż istnieje potrzeba zwiększenia infiltracji i trwałości przeniesionych komórek w tkance nowotworowej, w szczególności w ustalaniu guzów litych. Stwierdzenie, że ludzkie komórki Tsp mają spokojny fenotyp i wspólną biologię z komórkami Trm potencjalnie czyni je atrakcyjnymi kandydatami jako nośniki do adoptywnej terapii komórkowej. Te rozważania doprowadziły nas do zbadania wpływu adoptywnego transferu ludzkich komórek Tsp w kontekście modelu xeno-przeszczep przeciwko gospodarzowi (xeno-GVHD) i do zbadania ich mobilizacji do krążenia u pacjentów. W celu oceny potencjału proliferacji in vivo i funkcji efektorowej ludzkich komórek Tsp, przejmowaliśmy posortowane ludzkie komórki Tsp i kontrolowaliśmy komórki T (całkowite komórki T) u myszy z niedoborem odpornościowym NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl / SzJ (NSG) i analizował wszczepienie ludzkich komórek T i wynikową patologię tkankową 6 tygodni po adopcyjnym przeniesieniu. Adopcyjne przeniesienie ludzkich komórek Tsp prowadziło do większego wszczepienia ludzkich komórek T CD45 + w porównaniu z iniekcją całkowitych komórek T (Figura 7A). Było to również związane z większym stopniem naciekania tkanek (szczególnie w wątrobie) i stopniem ciężkości GVHD (ryc. 7, B i C). Figura 7 Ludzkie komórki Tsp powodują większą patologię tkankową po adopcyjnym przeniesieniu u myszy i mogą być mobilizowane do krążenia przez pleryksafor. Posortowane komórki Tsp i kontrolne komórki T (całkowita liczba komórek T); 100 000 każdego z nich przeniesiono retroorbitowo do pojedynczych myszy NSG i analizowano po 5 do 6 tygodniach. (A) wykres FACS pokazujący wszczepienie ludzkich komórek T CD45 +; to samo jest wykreślane na wykresie słupkowym. (B) Zdjęcia porównują patologię skóry, wątrobę i histopatologię skóry u myszy NSG otrzymujących Tsp i kontrolne komórki T. Oryginalne powiększenie × 200. (C) Wykres przedstawiający wynik GVHD dla wątroby i skóry. Eksperymenty powtarzano 3 razy z 4 myszami / grupą. (D) Wykres FACS przedstawia fenotyp Tsp na komórkach T CD8 + uprzednio i po śmierci i komórkach CD34 + z krwi obwodowej człowieka. (E) Wykres oznacza procent frakcji Tsp w komórkach CD8 + i CD34 + w punkcie wyjściowym i po mobilizacji (n = 6) [przypisy: moczówka prosta u psa, nfz warszawa leczenie uzdrowiskowe, linka treningowa dla psa ] [więcej w: bioxetin opinie, siódmy syn chomikuj, masc ochronna z wit a ]