Synergia między kaskadą plazminogenu a MMP-9 w chorobie autoimmunologicznej cd

Myszy zerowe MMP-3 (n = 8), po wstrzyknięciu patogennej IgG, rozwinęły ten sam stopień choroby BP, co myszy kontrolne WT (Tabela 1), i podobne poziomy aktywności MMP stwierdzono w skórze zmian w obu grupach myszy (Figura 2I). Ponadto, podobnie jak myszy WT, myszy zerowe MMP-3 (n = 8) wstępnie traktowane inhibitorem plazmidu p2-antyplazmina (a2-AP) stały się oporne na BP z minimalnymi poziomami aktywności plazmin w miejscu wstrzyknięcia IgG (Tabela 1). . Podsumowując, nasze dane wskazują, że plazmina aktywuje MMP-9 niezależnie od MMP-3. Brak aktywności plazminy nie wpływa na aktywację MC. Podpalanie pod wpływem naskórka wywołane przez przeciwciała anty-BP180 zależy od degranulacji MC, która osiąga wartości szczytowe po 2 godzinach od patogennego wstrzyknięcia IgG (26). Aby wykluczyć możliwość, że oporność myszy z niedoborem plazmin do eksperymentalnego BP wynika z braku aktywacji MC, określiliśmy ilościowo degranulację MC w patogennym Plgp / I wstrzykniętym IgG. i tuPA. /. myszy. Jak pokazano na Figurze 3, 2 godziny po patogennym wstrzyknięciu IgG, te myszy z niedoborem plazmin miały poziomy degranulacji MC podobne do tych u myszy WT i myszy z niedoborem tPA lub uPA (n = 6). Wyniki te pokazują, że aktywacja MC jest prawidłowa u myszy z niedoborem aktywności plazmininy i występuje przed generacją plazminy, a następnie aktywacją MMP-9. Figura 3 aktywacja u myszy z niedoborem Plg i tuPA. WT, Plg. / ., i tuPA. /. myszom wstrzykiwano id patogennej IgG (R530; 2,64 mg / g masy ciała). W 2 godziny po iniekcji, gdy degranulacja MC osiągnęła poziom szczytowy, skrawki skóry wybarwiono roztworem toluidyny na niebiesko. (A (D) Barwienie błękitem toluidynowym wykazało podobne stopnie degranulacji MC u patogennych myszy z WT, którym wstrzyknięto IgG i z niedoborem myszy. (E) MC w skórze właściwej zliczano i klasyfikowano jako degranulowane (ponad 10% granulek wykazujących fuzję lub rozładowanie) lub normalne (patrz Metody). Nie było znaczącej różnicy w degranulacji MC wśród tych myszy (średnia . SEM). Strzałki wskazują MC. Aktywacja MMP-9 jest zależna od plazmin. Zarówno proMMP-9, jak i actMMP-9 były obecne w uszkodzonej skórze myszy WT, co pokazano w zymografii żelatyny (Figura 4A, ścieżki i 3). Przeciwnie, niejonowe ekstrakty skóry z Plg. /. myszy i tuPA. /. myszy wykazywały jedynie proMMP-9 (Figura 4A, ścieżki 2 i 4). Plazmina przekształca proMMP-9 uwalniany z patogennych neutrofili stymulowanych IgB anty-mBP180 do działania MMP-9 w układzie komórkowym, jak oznaczono za pomocą zymografii żelatynowej i testu kolorymetrycznego MMP (Figura 4B, ścieżka i słupek 1). Ponadto, plazminę aktywuje rekombinowany mysi proMMP-9 in vitro (Figura 4C, linia 2 i bar 2). Wyniki te ujawniają zależną od plazmi- ny aktywację proteolityczną MMP-9 podczas tworzenia zmian. Figura 4 Aktywacja MMP-9 przez plazminę in vivo i in vitro. (A) W celu zidentyfikowania aktywacji MMP-9 w skórze zmianowej eksperymentalnego BP, noworodkowego Plg + / +, Plgp / p, tUPA + / + i tiPA. /. myszom wstrzykiwano id z patogennym IgG anty-mBP180. Próbki skóry otrzymano w 4 godziny po wstrzyknięciu IgG, a ekstrakty białkowe (30 .g / ścieżkę) analizowano za pomocą zymografii żelatynowej. Zarówno proMMP-9, jak i actMMP-9 zaobserwowano w uszkodzonych próbkach skóry myszy + / +, którym wstrzyknięto IgG (ścieżki i 3). W przeciwieństwie do tego, nie wykryto aktyMMP-9 w próbkach skóry patogennych szczepów Plg. /. (linia 2) i myszy tuPA (linia 4). (B) Aby pokazać aktywację MMP-9 w układzie komórkowym, mysie neutrofile (mPMN; x 105) były stymulowane przez patogenne IgG anty-mBP180 (5 ug / ml) plus antygen mBP180 (5 ug / ml) w 37 ° C przez godzinę. Supernatant następnie inkubowano z plazminą (2 .g / ml) w 37 ° C przez 16 godzin. proMMP-9 uwalniany przez neutrofile był aktywowany przez plazminę, jak pokazano na podstawie zymografii żelatynowej (linia 1) i testu kolorymetrycznego MMP (t. 1). n = 6; * P <0,001. (C) Aby pokazać aktywację MMP-9 in vitro, rekombinowany mysi proMMP-9 (1 (Ig) inkubowano z plazminą (1 ug) w 100 ul buforu reakcyjnego w 37 ° C przez 6 godzin i badano żelatyną. zymografia i oznaczenie kolorymetryczne MMP. Plazmina przekształciła proMMP-9 w działanie MMP-9 (linia 2 i bar 2), a aktywacja była blokowana przez inhibitor plazminowy. 2-AP (linia 3 i bara 3). n = 6; * P <0,001. Hamowanie aktywności plazminy blokuje tworzenie pęcherzy w doświadczalnym BP. Jeśli plazmina bezpośrednio uczestniczy w aktywacji MMP-9, co z kolei prowadzi do podepidermalnego pęcherzenia w doświadczalnym BP, wówczas blokowanie aktywności plazminy powinno hamować aktywację MMP-9 i fenotyp choroby. W związku z powyższym, wstrzyknięto noworodkom myszy WT patogenne IgG anty-mBP180 i 90 minut później wstrzyknięto je w tym samym miejscu z inhibitorem plazminy a2-AP. Myszy kontrolne, które otrzymały IgG anty-mBP180, a następnie PBS, opracowały intensywne blistry 12 godzin po podaniu przeciwciała (n = 9; Figura 5A). [więcej w: jaka sukienka na studniówkę, najśmieszniejsze nazwiska w polsce, krem ziaja liście manuka ] [hasła pokrewne: pro kolin, sinulan ulotka, jak oduczyć psa skakania ]