Przewlekłe zapalenie tłuszczu odgrywa kluczową rolę w rozwoju oporności na insulinę związanej z otyłością cd

Dodano streptawidynę sprzężoną z HRP (DAKO Corp., Carpinteria, California, USA) i inkubowano przez 30 minut, a następnie szkiełka przemyto PBS / 0,05% Tween-20. Na końcu dodano substrat peroksydazy diaminobenzydynę (Vector Laboratories Inc., Burlingame, California, USA) i inkubowano przez 15 minut. Szkiełka zostały przepłukane i wybarwione kontrastowo hematoksyliną Mayera. Dodano roztwór montażowy i szkiełka nakrywkowe. Wyizolowane komórki zrębu-naczyniowego zaszczepiano w szkiełkach komorowych (Nalge Nunc International, Naperville, Illinois, USA) w stężeniu 5 x 105 na komorę w DMEM zawierającym 20% FCS (HyClone Laboratories, Logan, Utah, USA) i 20 ng / ml rekombinowanej myszy G-CSF (R & D Systems Inc., Minneapolis, Minnesota, USA) do hodowli całonocnej. W celu przygotowania do utrwalenia komórki płukano pięciokrotnie PBS + (PBS uzupełniony mM MgCl2 i 0,1 mM CaCl2) i utrwalano w PBS + zawierającym 3% paraformaldehyd przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Komórki następnie inkubowano w PBS + zawierającym 50 mM NH4Cl przez 5 minut w temperaturze pokojowej i przepłukano trzy razy PBS +. Immunohistochemię na komórkach zrębowo-naczyniowych przeprowadzono w sposób opisany poniżej. Po utrwaleniu paraformaldehydem komórki zrębowe zostały użyte do barwienia immunohistochemicznego przy użyciu przeciwciała przeciw mysiemu F4 / 80. Pierwotne przeciwciało rozcieńczono 1:50 dla eksperymentów. Zastosowano przeciwciało drugorzędowe skoniugowane z fosfatazą alkaliczną (Serotec Inc.) (rozcieńczenie 1: 300). Lewamisol był stosowany do blokowania endogennej aktywności fosfatazy alkalicznej. Substrat fosfatazy alkalicznej zakupiono z Vector Laboratories Inc. Płytki wybarwiono kontrastowo hematoksyliną Mayera. Dodano roztwór montażowy i szkiełka nakrywkowe. Olej czerwony O był stosowany do barwienia lipidów w utrwalonych komórkach zrębowych-naczyniowych. Komórki przemyto trzy razy PBS +, a następnie raz w 60% izopropanolu. Dodaje się oleistą czerwień O i komórki inkubuje się przez 10 minut w temperaturze pokojowej. Komórki przemyto raz w 60% izopropanolu i trzy razy w PBS +. Szkiełka zostały przepłukane i wybarwione kontrastowo hematoksyliną Mayera. Dodano roztwór montażowy i szkiełka nakrywkowe. Wyniki Poziomy ekspresji genów w szlakach zapalnych są znacząco podwyższone w WAT otyłych myszy. Aby zbadać otyłość i indukowaną przez otyłość insulinooporność, przeprowadziliśmy globalne badania profilowania transkrypcyjnego z różnymi tkankami (WAT, brązowa tkanka tłuszczowa, mięśnie, wątroba, żołądek, podwzgórze, jelito cienkie i trzustka) pobrane od genetycznie otyłych myszy, w tym ob / ob myszy db / db, tubby, agouti i DIO. W szczególności odkryliśmy, że wiele z genów o podwyższonej ekspresji w WAT nie było zaangażowanych w biologii adipocytów; zamiast tego można je ogólnie podzielić na geny związane z makrofagami lub stanami zapalnymi. Spośród genów zwiększonych ponad dwukrotnie w co najmniej czterech z tych pięciu modeli, 59% (50/85) można zaliczyć do genów zapalenia, co określono za pomocą ich znanych funkcji. Pozostałe geny uczestniczyły w różnych szlakach molekularnych, w tym w magazynowaniu tłuszczu, metabolizmie cholesterolu, modyfikacji DNA, transkrypcji, podziałach komórkowych, transdukcji sygnału i nieznanych funkcjach (szczegóły w Tabeli dodatkowej 1; http://www.jci.org/cgi / content / full / 112/12/1821 / DC1). Wyniki te były zgodne z wcześniejszym badaniem na myszach ob / ob pozbawionych leptyny (18); jednak z wieloma modelami otyłości indukowanej genetycznie i dietą nasze dane sugerują, że reakcja zapalna jest ogólnym zjawiskiem otyłości, niezależnie od dostępności białka leptyny. Zauważyliśmy również, że to zjawisko było specyficzne dla WAT i nie było obserwowane w żadnej innej tkance, którą profilowaliśmy. Aby dokładnie poznać tę pozorną odpowiedź zapalną w WAT i zbadać jej rolę w otyłości i insulinooporności, skoncentrowaliśmy nasze badania kontrolne na dwóch genetycznych modelach myszy (ob / ob i db / db) oraz na modelu otyłości wywołanym dietą. Do dalszych badań wybraliśmy sześć genów makrofagów lub zapalnych: ADAM8, metaloproteinazy podobnej do dezintegriny, silnie eksprymowanej w linii monocytowej (19); makrofagowe białko zapalne-1. (MIP-1 a), gen pochodzący z komórek jednojądrzastych i zaangażowany w ostry stan zapalny podczas rekrutacji i aktywacji leukocytów polimorfojądrowych (20); MCP-1, który jest członkiem rodziny małych indukowalnych cytokin i który odgrywa rolę w rekrutacji monocytów do miejsc uszkodzenia i infekcji (21); antygen-1 makrofagów (MAC-1) (CDllb), integryna znajdująca się przeważnie na monocytach, makrofagach, neutrofilach i komórkach NK (22); F4 / 80, klasyczna glikoproteina powierzchniowa ograniczona makrofagiem (23); i CD68 (makrosialin), silnie glikozylowane białko transbłonowe eksprymowane specyficznie w makrofagach i komórkach związanych z makrofagami (24). Jak pokazano na Figurze 1a, poziomy mRNA tych sześciu genów były konsekwentnie i znacząco podwyższone w WAT myszy ob / ob, db / db i DIO, które były na diecie wysokotłuszczowej przez 16 tygodni, potwierdzając eksperymenty na mikromacierzy.
[przypisy: koktajl spalający tłuszcz, nfz warszawa leczenie uzdrowiskowe, jak oduczyć psa skakania na ludzi ]
[przypisy: kolmed międzylesie, aglan cena, afobam działanie ]