Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE ad 5

Membrany inkubowano z poliklonalnym Ab wytworzonym w króliczym łańcuchu ciężkim anty-ludzką ferrytynę (rozcieńczenie 1: 5000), a następnie inkubowano z jodowanym białkiem A. Krzywą standardową przygotowano z próbek ferrytyny śledziony końskiej typu i natężenia pasm określono przy użyciu fosforowodorowanie. Jednostki dla osi y to mikrogramy ferrytyny na miligram białka dla próbek wątroby i surowicy oraz nanogramy ferrytyny na miligram białka dla tkanki aortalnej. Standardowe słupki błędów mieszczą się w symbolach w niektórych przypadkach. AP <0,001. Aby dalej badać ekspresję ferrytyny na ścianie tętnicy, zastosowano immunocytochemię. Silne barwienie Ab dla ferrytyny zaobserwowano w sekcjach zmiany aortalnej przygotowanych z karmionych wysokimi żelazo (Figura 3c), ale nie u myszy o niskiej zawartości żelaza (Figura 3a). Epitopy ferrytyny obserwowane u myszy karmionych silnym żelazem kolokalizowały się głównie komórkami śródbłonka i makrofagami, czego dowodem jest brak kolokalizacji epitopami dla komórek mięśni gładkich (Figura 3d). Pojawieniu się białka ferrytynowego w zmianach nie towarzyszyło silne nagromadzenie żelaza, co obserwowano przez barwienie pruskiego błękitu Perla, chociaż kilka komórek było reaktywnych. W przeciwieństwie do tego pruski niebieski materiał barwiący wykryto szeroko w przydance aortalnej, mięśniu sercowym i osierdziu u myszy z wysokim żelazem, a barwienie zmian dotyczyło tylko kilku komórek (dane nie pokazane). Ogólnie, dieta z 2% żelaza całkowicie nasyciła transferynę żelazem, znacznie zwiększała poziom żelaza w surowicy i tkankach oraz zwiększała ilość białka ferrytyny w porównaniu z niskimi myszami karmionymi żelazem. Figura 3Nieznaczono barwienia dla ferrytyny i P-aktyny na ścianie tętnicy. ApoE. /. myszy karmiono dietą wysokogatunkową (2,0%) przez 24 tygodnie, a skrawki kriostatu o grubości 10. m pobierano w zatoce aorty. Pokazano seryjne skrawki dla myszy karmionych dietą nisko-żelazową (aib) i wysokotłuszczową dietą (cid) i barwiono na ferrytynę (a i c) i (3-aktynę (b i d). Epitopy P-aktyny wykorzystano do określenia obecności i umiejscowienia komórek mięśni gładkich. Komórki piankowe makrofagów można zobaczyć dla myszy karmionych silnym żelazem jako bulwiaste nasadki na prawej części każdej sekcji. W przypadku myszy karmionych niskim żelazem, komórki piankowate makrofagów są widoczne poniżej śródbłonka i przeplatają się w obrębie zmiany. × 400. Lipidy w surowicy i tkankach nie przyczyniają się do powstawania zmian. Zmniejszenie rozmiarów zmian miażdżycowych może wynikać ze zmniejszenia stężenia krążących lipidów z powodu karmienia wysokotłuszczową dietą. Aby przetestować tę możliwość, oznaczono ilościowo całkowity poziom cholesterolu i triglicerydów w surowicy, a także poziom lipidów w wątrobie. Co ważne, lipidy w surowicy albo nie były istotnie różne, albo były najwyższe dla 2% grupy karmionej żelazem. Stężenie całkowitego cholesterolu w surowicy było podobne w przypadku grup dietetycznych po 6 tygodniach (313 13 13 i 271 18 18 mg / dl w przypadku odpowiednio 0,02% i 2% w przypadku podawania żelaza) i 12 tygodni (363 18 18 i 390 18 18 mg / dl w przypadku 0,02 odpowiednio% i 2% żelaza) i znacząco wzrosły dla myszy karmionych silnym żelazem (431. 10 mg / dl) w porównaniu z myszami karmionymi niskim żelazem (322. 11 mg / dl; P <0,0001) po 24 tygodniach. . Stężenie triglicerydów w surowicy było stale wyższe dla 2% myszy karmionych żelazem karbonylowym (61. 6 mg / dl) w porównaniu z myszami kontrolnymi (43. 3 mg / dl; P <0,0001. 0,004 po 12 i 24 tygodniach) w każdym punkcie czasowym. . Nie zaobserwowano różnic między grupami żywieniowymi pod względem poziomów cholesterolu i triglicerydów w wątrobie (dane nie przedstawione). Zmieniona dystrybucja lipidów w surowicy między lipoproteinami również nie uwzględnia zmian w wielkościach zmian zatoki aortalnej pomiędzy grupami żywieniowymi. Badanie profilu lipoprotein po FPLC wykazało prawie identyczne wzory dla wysokiego żelaza. i myszy karmione niskim żelazem w 6 tygodniu (Figura 4). Podsumowując, obserwacje te wskazują, że zmiany w lipoproteinach w surowicy nie przyczyniły się do zmniejszenia wielkości zmian zatoki aortalnej obserwowanych u myszy karmionych silnym żelazem. Ryc. 4 Profile lipoproteinowe dla apoE. /. myszy karmione dietą o niskiej zawartości żelaza (0,02%) i żelaza (2%) przez 6 tygodni. Lipoproteiny oddzielono metodą FPLC, stosując kolumnę Superose 6, jak opisano w Methods. Stężenia cholesterolu (a) i triglicerydów (b) określono kolorymetrycznie i znormalizowano do całkowitego stężenia w osoczu. Wartości podano dla myszy karmionych niskim poziomem żelaza (symbole otwarte) i karmionych wysokim żelazem (symbole wypełnione). Frakcje 10. 20 zawierają VLDL, frakcje 21. 27 zawierają LDL, a frakcje 28. 35 zawierają HDL. Nadmiar żelaza w diecie nie indukuje utleniania białka wątrobowego. Aromatyczne aminokwasy są ważnymi celami dla uszkodzeń katalizowanych jonami metali (12). Aby sprawdzić, czy nadciśnienie żelaza może pośredniczyć w utlenianiu białek, orto-tyrozynie i dityrozynie, charakterystyczne produkty utleniania białka (28, 34) zostały zmierzone w próbkach wątroby od myszy karmionych dietami wysokowartościowymi i niskostopowymi [podobne: przyczyny suchego kaszlu, refluks u dziecka objawy, żel do mycia twarzy bioliq ] [podobne: chitinin extra, kolmed międzylesie, aglan cena ]