Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE ad 8

Korzystając z kombinacji chromatografii gazowej i spektrometrii masowej, czułej i specyficznej metody analitycznej, wykazaliśmy, że przeciążenie myszy żelazem nie miało wpływu na stężenie orto-tyrozyny lub dityrozyny w białkach wątroby. Traktowanie królików żelazem również nie zwiększyło peroksydacji lipidów w osoczu, co oceniono za pomocą analizy spektrometrycznej masą izotopową (6). W rzeczywistości wpływ żelaza na peroksydację lipidów jest złożony, ponieważ zarówno niedobór żelaza, jak i codzienne podawanie żelaza sprzyjają peroksydacji lipidów u szczurów (46). Obserwacje te podają w wątpliwość hipotezę, że żelazo sprzyja oksydacyjnemu uszkodzeniu białek i lipidów in vivo. Zbadaliśmy pomysł, że karmienie żelazem podniosłoby poziom mRNA dla panelu genów stresu oksydacyjnego w wątrobach myszy obciążonych żelazem. Read more „Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE ad 8”

Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE ad 7

Było to szczególnie niezwykłe, ponieważ poziomy lipidów w osoczu, o których wiadomo, że są determinantami miażdżycy tętnic, pozostały takie same lub zwiększały się skromnie podczas badania. Tak więc, pomimo hiperlipidemii normalnie wykazywanej przez ten szczep, podawanie żelaza chroniło przed miażdżycą. Kluczową kwestią eksperymentalną jest metoda dostarczania żelaza, ponieważ w większości badań na zwierzętach zastosowano pozajelitowo wstrzyknięte kompleksy żelaza dekstranu. Metoda ta znacznie zwiększa poziom żelaza w osoczu, ale większość żelaza jest metabolicznie niedostępna (35, 36), zarówno dlatego, że pozostaje związana z dekstranem, jak i dlatego, że żelazo dekstran jest wychwytywany przez makrofagi. W istocie niedokrwistość z niedoborem żelaza może współistnieć z normalnym lub podwyższonym poziomem żelaza w osoczu u ludzi leczonych żelazem dekstranem (36). Read more „Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE ad 7”

Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE ad 6

Wątroby zostały wykorzystane ze względu na ilość dostępnej tkanki i znaczące podwyższenia zawartości żelaza osiągnięte po karmieniu myszy 2% karbonylem żelaza. W wątrobie poziomy orto-tyrozyny i dityrozyny nie różniły się między myszami karmionymi dietami o niskiej i wysokiej zawartości żelaza (Figura 5), co sugeruje, że utlenianie białka nie było spowodowane przez nadmierne obciążenie żelazem w diecie. Figura 5 Wrześniowe poziomy orto-tyrozyny i dityrozyny dla apoE A /. myszy karmiono dietą o niskiej zawartości żelaza (0,02%) lub żelaza (2,0%) przez 24 tygodnie. Pokazano wartości dla poszczególnych próbek, a słupki oznaczają średnie (n = 5 myszy). Read more „Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE ad 6”

Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE ad 5

Membrany inkubowano z poliklonalnym Ab wytworzonym w króliczym łańcuchu ciężkim anty-ludzką ferrytynę (rozcieńczenie 1: 5000), a następnie inkubowano z jodowanym białkiem A. Krzywą standardową przygotowano z próbek ferrytyny śledziony końskiej typu i natężenia pasm określono przy użyciu fosforowodorowanie. Jednostki dla osi y to mikrogramy ferrytyny na miligram białka dla próbek wątroby i surowicy oraz nanogramy ferrytyny na miligram białka dla tkanki aortalnej. Standardowe słupki błędów mieszczą się w symbolach w niektórych przypadkach. AP <0,001. Read more „Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE ad 5”

Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE czesc 4

Skrawki oceniano pod kątem uszkodzeń po barwieniu hematoksyliną i eozyną przy użyciu obrazowania wspomaganego komputerowo i pakietu oprogramowania Optimas Image Analysis (Bioscan Inc., Edmonds, Washington, USA) (33). Immunocytochemiczne barwienie skrawków zatok aorty wykonano jak opisano wcześniej (33) z pewnymi modyfikacjami. Skrawki parafiny poddano deparafinizacji, przepłukano w PBS, inkubowano przez 10 minut w Peroxo-Block (Zymed Laboratories Inc., San Francisco, Kalifornia, USA) i gotowano w 0,01 M buforze cytrynianowym, pH 6,0 przez 10 minut. Skrawki inkubowano z króliczą anty-ludzką ferrytyną (rozcieńczenie 1: 100) (nr katalogowy 605 022, Roche Molecular Biochemicals Inc.) lub znakowaną peroksydazą chrzanową króliczą przeciwludzką aktynę mięśni gładkich (rozcieńczoną 1: 5) (DAKO Corp ., Carpinteria, Kalifornia, USA) przez 2 godziny w temperaturze pokojowej. Skrawki zostały opracowane przy użyciu zestawu Histomouse SP Kit (Zymed Laboratories Inc.) zgodnie z instrukcjami producenta. Read more „Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE czesc 4”

Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE cd

Granica wykrywania (sygnał / szum> 10) była mniejsza niż pmol dla wszystkich aminokwasów. Jony stosowane do wykrywania analitu i wzorca wewnętrznego to: fenyloalanina, m / z 383 i 389 jonów; tyrozyna, m / z 417 i 423 jony; orto-tyrozyna, m / z 595 i 601 jonów; o, o-dityrozyny m / z 1208 i 1220 jonów. Blisterkowalne żelazo z chemioterapią. Stężenia żelaza chelatowanego bleomycyną mierzono metodą Gullidge a i in. (29, 30). Read more „Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE cd”

Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE ad

Pokarm został usunięty z myszy na 4 godziny przed pobraniem krwi ze splotu oczodołu. Surowicę przechowywano w temperaturze ~ 70 ° C do czasu analizy. Myszy zabijano przez przemieszczenie kręgów szyjnych, a całe zwierzęta perfundowano 10 ml buforu przeciwutleniającego (100 .M dietylenotriaminopentaoctowego [DTPA], 100 .M butylowanego hydroksytoluenu [BHT], 0,1% etanolu, w PBS, pH 7,4) przez lewa komora. Tkanki szybko zamrożono w ciekłym azocie i przechowywano w temperaturze około 70 ° C. Tkanki stosowane do oznaczania poziomu orto-tyrozyny i dityrozyny zamrożono w buforze przeciwutleniającym. Read more „Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE ad”

Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE

Zaproponowano, że podwyższone poziomy żelaza tkankowego zwiększają ryzyko miażdżycy, być może sprzyjając tworzeniu pro-aterogennego utlenionego LDL. Pracując z myszami z niedoborem apoE (apoE A / J), które nie wymagają diety o wysokiej zawartości tłuszczu, aby rozwinąć miażdżycę, porównaliśmy wpływ standardowej diety (0,02% żelaza) lub 2% diety karbonylowej żelaza. Po 24 tygodniach myszy karmione 2% dietą z karbonylo-żelazem miały dwa razy więcej żelaza w osoczu, 9-krotny wzrost wykrywalnego bleomycyny wolnego żelaza w ich osoczu oraz dziesięciokrotnie więcej żelaza w wątrobach niż myszy kontrolne. Przemijające żelazo spowodowało skromny (30%) wzrost stężenia triglicerydów i cholesterolu w osoczu. Niemniej jednak, ten schemat nie zaostrzył się, ale raczej zmniejszył ciężkość miażdżycy o 50%, i nie udało się podwyższyć poziomu wątrobowego mRNA hemowej oksygenaz, który jest indukowany przez wiele różnych in vitro oksydacyjnych uszkodzeń. Read more „Przeciążenie żelazem zmniejsza miażdżycę u myszy z niedoborem apoE”

Wyrażanie CCR10 jest wspólną cechą komórek wydzielających Ab z komórek nabłonka i błon śluzowych nabłonka IgA ad 8

Komórki T bazujące na skórze CLA + są praktycznie nigdy nieobecne w przewodzie pokarmowym, prawdopodobnie dlatego, że nie mają receptora naprowadzającego jelitowego. 4. 7 niezbędnego do interakcji z żyłkami jelitowymi MAdCAM-1 + (23) i ponieważ żyłki jelitowe nie wykazują ekspresji adhezji- wyzwalając ligand CCR4 TARC / CCL17 (20). Zatem nawet jeśli limfocyty CLA + eksprymujące CCR10 mogą reagować na MEC, ich wejście do miejsc gastrojelitowych wyrażających MEC byłoby niezwykle nieskuteczne. Komórki T CLA + wyrażają integrynę a4 (3 wymagane do wiązania VCAM-1 wyrażanego przez śródbłonek w miejscach błon śluzowych, takich jak jama ustna, gruczoł ślinowy i płuca (23, 34, 36). Read more „Wyrażanie CCR10 jest wspólną cechą komórek wydzielających Ab z komórek nabłonka i błon śluzowych nabłonka IgA ad 8”

Wyrażanie CCR10 jest wspólną cechą komórek wydzielających Ab z komórek nabłonka i błon śluzowych nabłonka IgA ad 7

U myszy plazmidy IgA gruczołu sutkowego również eksprymują integrynę a4 (3, a laktacja śródbłonka gruczołu sutkowego eksprymuje MAdCAM-1 (33). Interesujące jest to, że śródbłonek gruczołu ślinowego nie wykazuje ekspresji MAdCAM-1, ale ekspresjonuje VCAM-1 (34), a zdolność A4 (1l i ewentualnie A4a7 na plazmazach IgA do wiązania VCAM-1 (35) może ułatwiać ich migracja do gruczołu ślinowego i innych tkanek nabłonkowych, takich jak tchawica i oskrzelik (36). Zatem plazmidy IgA powstające w jelitowych tkankach limfoidalnych, które koekstrują CCR10 i a4 <7, mogą być wyjątkowo zdolne do wejścia do miejsc śluzówkowych zawierających MEC, gdzie ekspresjonowane są MAdCAM-1 lub VCAM-1, podczas gdy te jelitowe plazmidy IgA, które również eksprymują CCR9 mogą dodatkowo wejdź do jelita cienkiego, w którym wyrażany jest TECK. Odwrotnie, plazmidy IgA powstające w nie-jelitowych śluzówkowych tkankach limfatycznych, takich jak migdałki i migdałki, które w znacznym stopniu nie zawierają CCR9 (i ekspresji niższych poziomów a4 . 7, EJ Kunkel, dane niepublikowane) mogą być ograniczone do nie-jelitowych miejsc śluzówkowych, gdzie stosują CCR10 w w połączeniu z innymi cząsteczkami adhezyjnymi, takimi jak a4 .1 i L-selektyna (8). Read more „Wyrażanie CCR10 jest wspólną cechą komórek wydzielających Ab z komórek nabłonka i błon śluzowych nabłonka IgA ad 7”