Leptyna wspomaga ponowną epitelializację rany i stanowi bezpośrednią funkcję leptyny w naprawie skóry ad 6

Dwie rany z grzbietów trzech zwierząt (n = 6) wycięto dla każdego doświadczalnego punktu czasowego i zastosowano do izolacji białka. Podtypy receptorów leptyny ObRa i ObRb są wskazane przez groty strzałek. Podrient receptora leptyny ObRb ulega ekspresji wyłącznie w keratynocytach warstwy podstawowej naskórka i nabłonka hiperproliferacyjnego na krawędzi rany. Ponieważ suplementacja leptyny wyraźnie przyspieszyła ponowną epitelializację rany u myszy ob / ob, ważne było określenie potencjalnych komórek docelowych dla funkcji leptyny w miejscu rany. W związku z tym przeprowadziliśmy badania immunohistochemiczne przy użyciu odpowiednio przeciwciał specyficznych dla podtypu receptora ObRb lub obu podtypów receptora leptyny. W skórze kontrolnej myszy typu dzikiego (Balb / c) i ob / ob, białko ObRb było specyficznie wyrażane w keratynocytach warstwy podstawowej naskórka (dane nie pokazane). Jak pokazano na Figurze 2c, ten sam wzór ekspresji ObRb obserwowano w całkowicie ponownie nabłonkowatych ranach 13 dni po urazie. Co więcej, ekspresja ObRb nie była ograniczona do warstwy podstawowej naskórka podczas naprawy, ale silne sygnały immunopozytywne można było wykryć w keratynocytach migrującego języka nabłonkowego na obrzeżach rany (Figura 2f). Ta sytuacja została stwierdzona u myszy typu dzikiego i ob / ob i okazała się niezależna od organizacji nabłonka proliferacyjnego. Zgodnie z danymi obserwowanymi w analizie Western blot, słabe zabarwienie keratynocytów nabłonka hiperproliferacyjnego można było wykryć dla podtypu receptora ObRb w dniu 5 po uszkodzeniu (dane nie pokazane), ale stało się wyraźnie widoczne w 7 dniu po zranieniu ( Figura 2f). Obserwowano ekspresję białka ObRa w keratynocytach myszy typu dzikiego i ob / ob. W przeciwieństwie do ekspresji izoformy ObRb, barwienie ObRa wykryto we wszystkich warstwach naskórka (Figura 2g). Ponieważ ekspresja izoformy receptora leptyny ObRb była ograniczona do proliferujących keratynocytów (naskórkowa warstwa podstawna, nabłonek hiperproliferacyjny), postawiliśmy hipotezę, że leptyna może pośredniczyć w bodźcu mitogennym wobec keratynocytów znajdujących się na marginesach rany. Dlatego też zbadaliśmy wzór proliferacji w hiperproliferacyjnym nabłonku myszy wstrzykniętych z leptyną lub myszy ob / ob wstrzykniętych PBS. W tym celu zabarwialiśmy sekcje od myszy ob / ob traktowanych leptyną lub traktowanych PBS za pomocą Ab wykrywającego marker proliferacji Ki67 (27). Należy zauważyć, że nabłonkowe języki z ran myszy kontrolnych, którym wstrzyknięto PBS, charakteryzowały się dezorganizacją i atrofią morfologii, a ponadto rozproszonym rozkładem keratynocytów proliferujących Ki67-dodatnich (Figura 2e). W przeciwieństwie do tego, rany myszy z wstrzykniętą leptyną wykazywały wysoce uporządkowaną i masywną masę keratynocytów na brzegach rany. Rany te charakteryzowały się nie tylko hiperproliferacyjnym nabłonkiem pokrywającym ranę, ale także dodatkowymi keratynocytami Ki67, które sięgały głęboko do tkanki ziarninowej (ryc. 2b). Ponadto całkowita liczba keratynocytów i keratynocytów proliferujących dodatnich dla Ki67 wydawała się znacznie zmniejszona w ranach izolowanych od zwierząt z niedoborem leptyny, traktowanych PBS (Figura 5a). Wyniki te sugerują, że leptyna może działać jako czynnik mitogenny dla keratynocytów podczas naprawy, prawdopodobnie działając na izoformę receptora leptyny ObRb, która ulega wyłącznie ekspresji w tym typie komórek w skórze. Figura 5 Wpływ leptyny na proliferację i aktywację STAT3 w keratynocytach HaCaT i ludzkich pierwotnych keratynocytach. (a) Fotografie o niskim powiększeniu (100 x) zamrożonych odcinków seryjnych analizowano pod kątem całkowitej liczby komórek keratynocytów lub proliferujących keratynocytów w nabłonku hiperproliferacyjnym z myszy ob / ob traktowanych leptyną (dootrzewnowo) i traktowanych PBS (dootrzewnowo) ob / ob myszy (n = 3), jak wskazano. Dokonano tego, licząc zabarwione hematoksyliną jądra keratynocytów lub jądra keratynocytów wybarwione Ki67 w określonym obszarze (3 x 2 mm). Dane wyrażono jako całkowitą liczbę jąder keratynocytów. SD (n = 3). AP <0,01, jak wskazano w nawiasach, procent średnich w porównaniu ze zwierzętami leczonymi leptyną. (b) zależne od dawki działanie ludzkiej rekombinowanej leptyny (0,1. 500 ng / ml) na proliferację keratynocytów HaCaT (otwarte słupki) lub pierwotne (wypełnione słupki). Proliferację określono przez inkorporację BrdU. Dane wyrażono jako procent niestymulowanej kontroli. Średni procent zmiany proliferacji. Pokazano SD (wartości reprezentują średnią z pięciu testów z odczytem dziewięciu dołków dla każdego stężenia, n = 45). AP <0,01 w porównaniu z kontrolą; BP <0,05 w porównaniu z kontrolą [podobne: żel do mycia twarzy bioliq, koktajl spalający tłuszcz, sennik koleżanka z pracy ] [podobne: flucontrol max, bioxetin opinie, jak oduczyć psa skakania po ludziach ]