Leptyna wspomaga ponowną epitelializację rany i stanowi bezpośrednią funkcję leptyny w naprawie skóry ad 5

Zatem funkcja leptyny sugeruje rolę głównie w pobudzaniu procesów nabłonkowych podczas naprawy. Wpływ miejscowego dodatku leptyny na gojenie się ran u myszy typu dzikiego. Myszy Balb / c traktowano miejscowo leptyną, jak opisano w Metodach. Myszy traktowane PBS zastosowano jako kontrolę. (b) Zraniona tylna skóra reprezentatywnych myszy Balb / c (5 dni po zranieniu). Rany leczono miejscowo przez cały 5-dniowy okres po zranieniu 5 .g leptyny / 20 .l PBS dwa razy dziennie (+ leptyna) lub 20 .l PBS (+ PBS), odpowiednio. (a i c) zamrożone skrawki barwione hematoksyliną / eozyną z 5-dniowych ran wyizolowanych od myszy Balb / c, które leczono miejscowo 5 .g leptyny / 20 .l PBS dwa razy dziennie (a) lub 20 .l PBS tylko (do). Strzałki wskazują wiodącą krawędź migrującego nabłonka. e, nabłonek; g, tkanka ziarninująca; gH, z atrofią tkanki ziarninowej; on, nabłonek hiperproliferacyjny; s, parch. Izoformy receptora leptyny, ObRa i ObRb, ulegały zróżnicowanej ekspresji podczas gojenia się ran. Ponieważ miejscowo stosowana leptyna znacznie nasilała ponowną epitelializację rany u myszy ob / ob i myszy typu dzikiego, zbadaliśmy wzór ekspresji receptora leptyny w skórze normalnej i podczas naprawy skórnej u myszy ob / ob wstrzykniętych z leptyną lub PBS (dootrzewnowo) , odpowiednio. Do tej pory zidentyfikowano cztery różne warianty składania genu receptora leptyny, z których wykazano, że tylko izoforma ObRb pośredniczy w wewnątrzkomórkowym sygnalizowaniu poprzez aktywację kaskady Jak-STAT (5). Stosując technikę RT-PCR, warianty splicingowe ObRa i ObRb receptora leptyny można było zamplifikować z RNA z niezwiązanej skóry kontrolnej iz 7-dniowych lub 13-dniowych ran myszy typu dzikiego (Balb / c) i ob / ob myszy. Tożsamość została potwierdzona przez klonowanie i późniejszą analizę sekwencji zamplifikowanych fragmentów cDNA receptora (dane nie pokazane). W celu zbadania regulacji mRNA ObR i ekspresji białka podczas gojenia się ran, wykonaliśmy test ochrony przed RNazą (Figura 4a) i analizę Western blot (Figura 4b). Użyliśmy antysensownej sondy RNA, która hybrydyzowała z regionem mRNA rozpoznającym zarówno warianty składania receptora leptyny-receptora, jak i poliklonalne Ab rozpoznające zarówno ObRa, jak i ObRb. Jak pokazano na Fig. 4, mRNA i białko ObR ulegały ekspresji w niezwiązanej skórce myszy ob / ob, ale zranienie doprowadziło do szybkiego spadku poziomów mRNA i białka ObR. Minimalną ekspresję ObR obserwowano 3 dni po zranieniu. Poziomy mRNA dla ObR zaczęły zwiększać się 5 dni po uszkodzeniu, a następnie wyraźnie wykrywalne poziomy białek specyficznych dla ObRb 7 dni po zranieniu. Warto zauważyć, że kinetyka ekspresji ObR była identyczna dla typu dzikiego (Balb / c, dane nie pokazane) i myszy ob / ob uzupełnionych leptyną (Figura 4, aib). U tych zwierząt, co interesujące, poziomy mRNA dla ObR pozostawały podwyższone po ponownym nabłonku w dniu 13 w porównaniu ze skórą kontrolną. Przeciwnie, myszy ob / ob traktowane PBS nie wykazywały wyraźnego odzyskania mRNA ObR i ekspresji białka po zranieniu, a poziomy ekspresji ObR pozostały zmniejszone nawet po 13 dniach naprawy (Figura 4b, porównaj 13-dniową ranę). Tak więc zaobserwowaliśmy ekspresję funkcjonalnego receptora leptyny ObRb, który ma być regulowany podczas naprawy. Ponadto, jego leptyna ligandowa była konstytutywnie obecna w nienaruszonej skórze i miejscu zranienia podczas normalnego gojenia, ponieważ zwierzęta kontrolujące Balb / c ujawniły poziomy leptyny w przybliżeniu 30 pg / 50. G całkowitego białka z nienaruszonej skóry lub całkowitego zranionego białka (dzień 1, 3, 5, 7 i 13 po zranieniu), odpowiednio, jak oceniono za pomocą testu ELISA swoistego wobec leptyny. Dlatego leptyna poprawiła rozregulowaną ekspresję własnego receptora u myszy ob / ob pozbawionych leptyny, a ponadto najprawdopodobniej spowodowała zwiększoną ekspresję ObRb podczas późnej fazy naprawy. Figura 4 Ocena ekspresji receptora leptyny podczas gojenia się ran u myszy Balb / c (wt) i C57BL / 6J-ob / ob. (a) Myszy C57BL / 6J potraktowano dootrzewnowo leptyną, jak opisano w Metodach. Całkowity komórkowy RNA (20 .g) z nienaruszonej i zranionej skóry pleców myszy C57BL / 6J-ob / ob potraktowanych leptyną, jak wskazano, analizowano za pomocą testu ochrony przed RNazą za pomocą sondy hybrydyzacji RNA komplementarnej do wariantów składania receptora leptoniny ObRb i ObRa. Dla każdego eksperymentalnego punktu czasowego, trzy rany od trzech zwierząt (łącznie: n = 9 ran) zebrano do analizy. Czas po urazie jest wskazany dla każdej linii. Skóra kontrolna odnosi się do nienaruszonej skóry. Sondę hybrydyzacyjną (1000 zliczeń / min) dodano do sondy znakowanej etykietą. Ekspresja mRNA GAPDH jest pokazana jako kontrola obciążenia w dolnym panelu. (b) Całkowite białko (50 .g) z lizatów nienaruszonej i zranionej skóry pleców (dzień 1, 3, 5, 7 i 13 po urazie, wskazanym dla każdej ścieżki) myszy C57BL / 6J-ob / ob traktowanych leptyną lub PBS (stosowany jako kontrola) jak wskazano analizowano metodą immunoblottingu pod kątem obecności białek podtypu receptora leptyny ObRa i ObRb
[więcej w: turnusy rehabilitacyjne krynica zdrój, pro kolin, alzheimer pierwsze objawy ]
[więcej w: pro kolin, sinulan ulotka, jak oduczyć psa skakania ]