Inhibitor PKC AEB071 może być terapeutyczną opcją dla łuszczycy ad 7

Komórki stymulowano 50 ng / ml PMA (Sigma-Aldrich) przez 24 godziny w obecności AEB071, a supernatanty analizowano pod kątem IL-8 i TNF-a. za pomocą testu ELISA. Ludzkie makrofagi przygotowano z monocytów, które zostały wyizolowane z kożuszków leukocytarnych za pomocą MACS. Monocyty inkubowano z GM-CSF przez ogółem 7 dni, z pożywką zmieniającą się po 3 dniach. Komórki stymulowano przez 24 godziny z mg / ml zawiesiny zymosanu (Sigma-Aldrich) w obecności AEB071. Supernatanty analizowano pod kątem TNF-a i poziomy IL-23 w teście ELISA. Wszystkie eksperymenty in vitro przeprowadzono z potrójnymi próbkami. Alergiczne kontaktowe zapalenie skóry u szczurów Badanie to przeprowadzono zgodnie z protokołem badania MA 58-3260 / 03, zatwierdzonym przez Landesregierung Wien, Magistratsabteilung 58, Wiedeń, Austria. Uczulanie szczurów Crl: CD (SD) rozpoczęto od 80 .l 2% 2,4-dinitrofluorobenzenu (DNFB, Merck, rozpuszczono w 50% acetonu, 10% DMSO i 38% oleju z oliwek, obj./obj.), Co naniesiono w objętości 20 ul na wewnętrzną powierzchnię obydwu płatków usznych i obu ogolonych obszarów pachwinowych w dniu 1. W dniu 12, alergiczne kontaktowe zapalenie skóry wywołano w miejscach testowych (o średnicy 15 mm) na obu ogolonych bokach przy 30. l DNFB (0,5% w 80% acetonu, 19,5% oleju z oliwek, obj./obj.). Obserwowano zmiany grubości skóry jako miary stanu zapalnego skóry przed i 24 godziny po prowokacji. Zwierzęta traktowano doustnym zgłębnikiem godzinę przed i 4 godziny po prowokacji. Zmierzono grubość fałdu fałdowego u zwierząt traktowanych związkiem i podłożem, a dane analizowano za pomocą testu t. Ze względów praktycznych zwierzęta poddawano sedacji w celu posługiwania się izofluoranem. Po pierwsze w badaniach na ludziach pojedynczych i dawkach wielokrotnych Badanie CAEW334A2101 było jednoośrodkowym, randomizowanym, podwójnie ślepym, prowadzonym w grupach równoległych, opóźnionym w czasie, pojedynczym badaniem dawki doustnej u zdrowych osób, z zastosowaniem kontrolnej grupy placebo i 6 poziomów dawek AEB071 (10, 25, 50, 100, 200 i 500 mg). Badanie przeprowadzono w Allschwil, w Szwajcarii, za pośrednictwem Swiss Pharma Contract Ltd. po zatwierdzeniu przez komisje etyczne Uniwersytetu Medycznego w Bazylei (Bazylea, Szwajcaria) oraz szwajcarskiego organu ds. Zdrowia (Swissmedic, Bern, Szwajcaria). W sumie 48 osób zgłosiło się i ukończyło badanie; 36 otrzymało lek, a 12 otrzymało placebo. Zdarzenia niepożądane odnotowano podczas całego badania. Holter-ECG wykonywano na początku badania i w 1. dniu badania. Ciśnienie krwi i EKG rejestrowano przy dawce 1, 1,5, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 24, 48 i 72 godzin po dawce. Parametry laboratoryjne uzyskano 3, 24, 48 i 72 godziny po dawce. Test farmakodynamiczny dla proliferacji limfocytów w krwi pełnej. Proliferację limfocytów T w pełnej krwi przeciwzakrzepowej po stymulacji ex vivo fitohemaglutyniną określono przez inkorporację [3H] -tymidyny. Ludzką pełną krew (20 ul) uzupełniono o 180 ul pożywki X-Vivo10 (BioWhittaker Europe) zawierającej 3,3 mg / ml fitohemaglutyniny. Ogólnie przygotowano 6 replikowanych studzienek. Po 48 godzinach studzienki pulsowano [3H] -tymidyną (1. Ci / studzienkę) przez noc i radioaktywność mierzono w liczniku scyntylacyjnym BETAPLATE (Wallac). Stymulacja krwi pełnej i wykrywanie mRNA IL2. Krew (270 .l) aktywowano w dwóch powtórzeniach za pomocą koktajlu 30 .l PMA / anty-CD28 przez 6 godzin w 37 ° C / 5% CO2. Końcowe stężenie PMA i przeciwciała anty-CD28 wynosiło odpowiednio 14 ng / ml i ng / ml. Pobudzoną krew (200 .l) inkubowano z 700 .l buforu do lizy, a następnie utrzymywano w <80 ° C. Całkowity RNA wyekstrahowano i poddano odwrotnej transkrypcji do cDNA zgodnie ze standardowymi procedurami. Real-time PCR przeprowadzono przy użyciu ABI Prism 7900HT (Applied Biosystems) w połączeniu z TaqMan PCR Master Mix (Applied Biosystems, nr katalogowy 4304437). Testy TaqMan były dostępne w bazie danych Applied Biosystems i zostały zakupione: GAPDH (katalog Hs99999905_m1) i IL-2 (katalog Hs00174114_m1). Warunki PCR obejmowały jeden cykl w 50 ° C przez 2 min, a następnie cykl denaturacji w 95 ° C przez 10 min i 40 cykli amplifikacji, etap denaturacji w 95 ° C przez 15 s, i etap odprężania / wydłużania w 60 ° C przez min. Względną kwantyfikację mRNA przeprowadzono przy użyciu standardowej krzywej dla genu metabolizmu podstawowego (Ambion, nr katalogowy 7976). Wydajność reakcji obliczono ze nachylenia krzywej standardowej: wydajność = 10. / nachylenie. 1. Ponieważ każde rozcieńczenie standardowego cDNA miało znane stężenie, ilość (liczba kopii) cDNA w każdej próbce mogła być określona, zgodnie z wartościami CT. Normalizację próbek przeprowadzono przez obliczenie stosunku poziomów ekspresji genu będącego przedmiotem zainteresowania do genu metabolizmu podstawowego. Badanie CAEB071A2101 było 2-tygodniowym, wielodawkowym, z podwójnie ślepą próbą, kontrolowanym placebo badaniem oceniającym bezpieczeństwo, tolerancję i farmakokinetykę podawania doustnego AEB071 dwa razy dziennie oraz badanie farmakodynamiki doustnego AEB071 u pacjentów z umiarkowaną do ciężkiej łuszczycą. [podobne: refluks u dziecka objawy, najśmieszniejsze nazwiska w polsce, przychodnia góra kalwaria ] [patrz też: isonasin, trosicam 15 mg, najsmieszniejsze nazwiska ]