Humanizowany model doświadczalnego autoimmunologicznego zapalenia błony naczyniowej oka u myszy transgenicznych HLA klasy II ad

W obrębie każdego gatunku widoczna jest zależna od szczepu podatność, która co najmniej częściowo wynika z kontroli MHC. Podatne haplotypy H2 to H2b, H2d, H2k i H2r. Kontrola podatności MHC na EAU w haplotypie H2k została wstępnie zmapowana do podregionu IA (homolog ludzkiego HLA-DQ), z efektami modyfikującymi z locus IE (homologiczny z ludzkim HLA-DR) (15). Aby lepiej zbadać rolę cząsteczek HLA w patogenezie zapalenia błony naczyniowej, podjęliśmy się opracowania. Humanizowanego. model EAU. W tym celu indukowaliśmy EAU u myszy wyrażających cząsteczki transgeniczne (TG) HLA-DR3, -DR4, -DQ6 lub -DQ8 pod nieobecność endogennej klasy II (A (O) (16). Te myszy pozytywnie wybierają repertuar komórek T wyrażających różne V. Receptory komórek T, które mogą identyfikować immunogenne epitopy peptydów podobne lub identyczne do ludzkich osobników tego samego genotypu HLA-DR lub -DQ (16, 17). Pokazujemy, że wszystkie testowane myszy HLA TG rozwinęły EAU po immunizacji IRBP. Ponadto u myszy HLA-DR3 TG rozwinęło się ciężkie zapalenie błony naczyniowej oka po immunizacji S-Ag, do którego myszy typu dzikiego są wysoce oporne. Badania blokowania przeciwciał potwierdziły, że antygeny były rozpoznawane przez komórki T w kontekście ludzkich cząsteczek HLA. Ponadto rozpoznawanie peptydów pochodzących z S-Ag i peptydów pochodzących od IRBP przez myszy HLA TG różni się od rozpoznawania przez myszy typu dzikiego i wykazuje pewne podobieństwo do pacjentów z zapaleniem błony naczyniowej. Wreszcie, podobnie jak w klasycznej EAU, choroba może być przenoszona przez komórki odpornościowe o fenotypie Th1, ale nie przez surowicę odpornościową. Ten nowy humanizowany model zapalenia błony naczyniowej stanowi bardziej odpowiednie przybliżenie ludzkiego zapalenia błony naczyniowej oka niż dostępne dotąd modele gryzoni i ułatwi charakterystykę epitopów naczyniotwórczych prezentowanych przez różne typy HLA klasy II. Metody Zwierzęta. Myszy pojedynczej TG HLA-DR4, -DQ6 i -DQ8 zostały opracowane w klinice Mayo i zostały opisane wcześniej (18. 20). Myszy HLA-DR3 pierwotnie opracowane przez Güntera Hammerlinga i współpracowników (21) wyhodowano na podłożu A. 0 w klinice Mayo. Myszy HLA-DR3 TG, które niosą geny HLA-DRA * 0103 i DRB1 * 0301 na tle H2-AH2 klasy II ujemnej H2-AO0 (A (3DR3) eksprymują ludzki antygen DR3 jako jedyną jedyną MHC klasy II cząsteczka (22). Myszy HLA-DR4 TG posiadały gen HLA-DRB1 * 0401 na tle A (O, zmodyfikowane w celu ekspresji cząsteczek IE przez wstawienie genu dla IE. łańcuch od haplotypu H2k (Ea k / E yAA 0,0DR4) (18). W związku z tym koeksprymowali mysie cząsteczki H2-IE i ludzkie cząsteczki HLA-DR4. Myszy HLA-DQ6 TG niosły transgenów DQA1 * 0103 i DQB1 * 0601 na tle A (O (A (OQQ6) (19). Podobnie, myszy HLA-DQ8 TG posiadały ludzkie geny DQA1 * 0301 i DQB1 * 0302 (A . 0.DQ8) (20, 23). Obie myszy HLA-DQ TG eksprymowały ludzką cząsteczkę DQ jako swój jedyny antygen MHC klasy II (tabela 1). Kontrolne były mioty z niedoborem DR3 i DR4, myszy A. 0, myszy A. 0 eksprymujące antygeny IE (E. K / E. BA. 0) i myszy C57BL / 10 lub C57BL / 6. Mleczarze z ujemnym poziomem DR3 nie eksprymują żadnych cząsteczek MHC klasy II, których genotyp jest równoważny z genami myszy A0. Mleczarze z ujemnym wynikiem DR4 wykazywały ekspresję cząsteczki IE, o genotypie porównywalnym z Ek / EaBaA0. Te myszy miały cząsteczkę H2-IE jako jedyny antygen MHC klasy II. H2-IAb jest jedyną cząsteczką MHC klasy II eksprymowaną przez macierzysty szczep C57BL / 10, który ma wadliwy gen kodujący E. i nie może wyrażać cząsteczek IE (tabela 1). Tabela Genotyp IMHC II i fenotyp szczepów myszy stosowanych w tym badaniu Zwierzęta hodowano i utrzymywano w NIH lub w Klinice Mayo w warunkach specyficznych dla wolnych od patogenów i podawano wodę i karmę ad libitum. Opieka i wykorzystywanie zwierząt było zgodne z wytycznymi instytucjonalnymi. Genotypowanie. Myszy badano przesiewowo pod kątem obecności ludzkiej cząsteczki HLA za pomocą PCR, jak opisano (24, 25). Ekspresję ludzkich lub mysich antygenów MHC oceniano ilościowo za pomocą cytometrii przepływowej komórek limfatycznych i splenocytów przy użyciu skoniugowanego z FITC anty-DR (klon L243), anty-DQ (klony Tü 39 i Tü 169), anty-IA (klon AF6 -120,1) lub przeciwciał anty-IE (klon 14-4-4S) (BD Pharmingen, Franklin Lakes, New Jersey, USA) zgodnie z zaleceniami producenta. Myszy, które nie wykazywały ekspresji cząsteczek HLA za pomocą cytometrii przepływowej, zostały wyłączone z analizy. Antygeny i odczynniki. IRBP bydlęcy (bIRBP) oczyszczono z ekstraktów siatkówki jak opisano (26) metodą chromatografii powinowactwa na ConA, a następnie chromatografii jonowymiennej na kolumnie Pharmacia MonoQ. Bydlęce S-Ag (bS-Ag) przygotowano z przepływu kolumny ConA w następujący sposób. Ekstrakt poddano dializie wobec 10 objętości 10 mM HEPES, 15 mM NaCl, mM EDTA, mM benzamidyny, pH 7,0, przy czym bufor zmienił się raz.
[podobne: przychodnia góra kalwaria, filet z łososia na patelni, usg stawów biodrowych u niemowląt kraków ]
[więcej w: tormed lubliniec, laremid ulotka, disnemar xylo ]