Humanizowany model doświadczalnego autoimmunologicznego zapalenia błony naczyniowej oka u myszy transgenicznych HLA klasy II ad 6

Działanie cytotoksyczne przeciwciał zostało wykluczone, ponieważ przeciwciała anty-HLA nie wpływały na proliferację limfocytów typu dzikiego na antygen, a ponieważ liczba komórek w tle w obecności przeciwciał bez antygenu nie różniła się od tła w obecności samej pożywki (dane nie pokazane ). Figura 4 Odpowiedź proliferacyjna komórek węzłów chłonnych na bS-Ag. Pokazano średnią wskaźników stymulacji obserwowanych w kilku eksperymentach. Paski błędów wskazują SE. Istotna różnica w porównaniu z kontrolą (P. 0,05) jest wskazywana gwiazdką. Liczby tła zmieniały się w zakresie od 1500 do 3 000 cpm w zależności od grupy. Należy podkreślić, że silne odpowiedzi proliferacyjne obserwowano we wszystkich genotypach, z wyjątkiem Ap, niezależnie od tego, czy rozwinęły się, czy nie. Podobnie, wszystkie szczepy, z wyjątkiem Ap, wytwarzały reakcje nadwrażliwości typu opóźnionego na S-Ag i IRBP (dane nie pokazane). Wskazuje to, że nie tylko patogenne, ale również niepatogenne epitopy rozpatrywanych antygenów siatkówki zostały funkcjonalnie przedstawione przez ludzkie cząsteczki klasy II. Patogeneza EAU u myszy HLA TG: odpowiedź komórkowa z dominującym w Th1 profilem cytokinowym i rolą modyfikującą przeciwciała. Badania EAU u myszy typu dzikiego wskazywały na centralną rolę odpowiedzi typu Th1 w patogenezie choroby (1). W celu oceny odpowiedzi myszy HLA TG na immunizację immunizacyjną, zmierzono cytokiny w supernatantach z węzłów chłonnych i komórek śledziony z immunizowanych myszy, które stymulowano in vitro antygenem immunizującym. Wyselekcjonowaliśmy jako reprezentatywne szczepy myszy DQ8 TG immunizowane bIRBP i myszy DR3 TG immunizowane bS-Ag, które były wysoko odpowiadającymi na odpowiednie antygeny. Oba szczepy wytwarzały bardzo wysokie poziomy IL-6, co było również typowe dla myszy C57BL / 6 typu dzikiego (nie pokazano). Spośród cytokin typujących odpowiedź Th1 lub Th2, IFN-y i TNF-a były dominujące nad IL-4, IL-5 i IL-13. Myszy DR3 wytwarzały względnie więcej IFN-y niż myszy DQ8 (ryc. 5, aib). Tak więc EAU indukowane u myszy HLA TG wydaje się być związane z profilem odpowiedzi głównej cytokiny Th1, analogicznym do klasycznego. model EAU u myszy typu dzikiego. Figura 5 Odpowiedzi na cytokinę. Wytwarzanie cytokin przez komórki węzłów chłonnych od myszy HLA-DQ8 TG stymulowanych za pomocą bIRBP (a) i komórek węzłów chłonnych od myszy HLA-DR3 TG stymulowanych bS-Ag (b), mierzonych za pomocą multipleksowego testu ELISA. Pokazano miana w pg / ml uśrednione z dwóch eksperymentów. U myszy typu dzikiego EAU może być adoptatywnie przenoszona przez komórki układu odpornościowego, ale nie przez surowicę odpornościową. W celu sprawdzenia, czy patogeneza EAU u myszy HLA TG była związana z komórkami lub przeciwciałami, przeszczepialnie przeniesiono komórki, surowicę lub komórki i surowicę razem z immunizowanych na naiwne syngeniczne myszy, po których następowało badanie dna oka. Aktywowane limfocyty od immunizowanych myszy hodowanych z antygenem w obecności IL-12 (33) były zdolne do transferu EAU do naiwnych syngenicznych biorców (Figura 6). Żadna z myszy, które otrzymały samą surowicę odpornościową o wysokim mianie (miana przeciwciał pomiędzy x 10 6 i x 10 7, patrz Metody) rozwinęła chorobę. Co ciekawe, po połączeniu komórek i surowicy, surowica była w stanie nieznacznie, ale konsekwentnie podnosić ocenę choroby w porównaniu z samymi komórkami, co sugeruje, że przeciwciała mogą modyfikować przebieg choroby. Figura 6 Przyspieszone przenoszenie komórek i / lub surowicy. Myszy biorców podano wlewowi surowicy, komórek lub komórek i surowicy od immunizowanych syngenicznych dawców. Po opracowaniu EAU przeprowadzono badanie dna oka. (a i b) Oceny choroby od biorców HLA-DQ8 i HLA-DQ6, których dawcy immunizowano bIRBP. (c) Oceny choroby u biorców HLA-DR3, których dawcy byli immunizowani za pomocą bS-Ag. Pokazane jest jedno z dwóch reprezentatywnych eksperymentów z pięcioma myszami na grupę. * Statystycznie istotna różnica w wynikach z samych komórek (P. 0,05). Trend (P. 0,1). Wykrywanie epitopów komórek T epitopów IRBP i S-Ag u myszy HLA TG. Wyniki opisane powyżej wskazują, że komórki T odpowiadające na antygen siatkówki prezentowane na cząsteczkach HLA były zaangażowane w proces chorobowy u myszy HLA TG. Ponieważ repertuar limfocytów T ograniczony do klasy II jest wybrany u tych myszy przez ludzką klasę II, postanowiliśmy zbadać rozpoznawanie epitopów myszy HLA TG. Wybraliśmy jako reprezentatywne szczepy o wysokiej podatności na chorobę dla każdego antygenu: DQ8 dla IRBP i DR3 dla S-Ag. Myszy immunizowano natywnym antygenem bydlęcym, a odpowiedzi komórek śledziony były przywoływane in vitro z panelem zachodzących na siebie peptydów reprezentujących całą pierwszą powtórzenie hIRBP lub całą sekwencję hS-Ag. Odpowiedzi zostały porównane z odpowiedziami haplotypu myszy typu dzikiego H2b (C57BL / 6)
[patrz też: turnusy rehabilitacyjne krynica zdrój, najśmieszniejsze nazwiska w polsce, krem ziaja liście manuka ]
[hasła pokrewne: isonasin, trosicam 15 mg, najsmieszniejsze nazwiska ]