Hamowanie PKC łagodzi fenotyp serca w mysim modelu dystrofii miotonicznej typu 1 ad

W ciągu 3 tygodni po indukcji EpA960. RNA, myszy te wykazywały wysoką śmiertelność, nieprawidłowości w przewodzeniu, dysfunkcję skurczową i rozkurczową, jak również zmiany molekularne obserwowane u pacjentów z DM1, takie jak kolokalizacja MBNL1 z ogniskami RNA i odwrócenie splicingu w embrionach. wzory (21). Co istotne, aktywowane PKCa / P II i zwiększone poziomy CUGBP1 były widoczne w ciągu 6 godzin po indukcji ekspandowanej ekspresji CUG RNA (17, 21), silnie sugerując, że są to pierwotne odpowiedzi na ekspresję toksycznego RNA zawierającego powtórzenie CUG, które przyczyniają się do Patogeneza DM1. Aby określić, czy aktywacja PKC jest wymagana do wywołania patogenności EpA960. RNA, użyliśmy specyficznego inhibitora PKC, Ro-31-8220, aby zapobiec aktywacji PKC (3 /. II po indukcji EpA960. RNA. Ten inhibitor był wcześniej dobrze scharakteryzowany w tkance mysiej tkanki mózgowej poprzez jego zdolność do hamowania izocytów PKC i poprawy kurczliwości serca [23]. Tutaj pokazujemy, że podawanie Ro-31-8220 do swoistego dla mysiej modelu DM1 dla serca zapobiega aktywacji PKC (3 (3), jak również hiperfosforylacji i regulacji w górę CUGBP1. Co ważne, podawanie Ro-31-8220 znacznie poprawiło śmiertelność i polepszyło przewodnictwo / dysfunkcję skurczu serca. Zgodnie z hipotezą, że patogeneza wywołana przez EpA960 Jest mediowana co najmniej w części przez regulację w górę CUGBP1, błędnemu składaniu regulowanych CUGBP1 celów pre-mRNA zapobiegano przez podawanie Ro-31-8220, podczas gdy zdarzenia splicingu regulowane przez MBNL nie były. Wyniki te sugerują, że MBNL1 i CUGBP1 mają różne role w patogenezie serca DM1. Co ważne, podawanie Ro-31-8220 nie poprawiło śmiertelności w drugim modelu mysim, w którym CUGBP1 ulega indukowalnej nadmiernej ekspresji w sercu z użyciem transgenicznego indukowalnego przez tetracyklinę. Wyniki te wskazują, że hamowanie PKC nie ma wpływu na kardiopatię wywołaną niezależnym od PKC wzrostem CUGBP1. Nasze wyniki sugerują, że aktywacja szlaku PKC jest pierwotnym patogennym zdarzeniem i że wczesne zniesienie aktywności PKC poprawia patologiczne cechy sercowe DM1. Wyniki Inhibitor PKC Ro-31-8220 znacząco poprawił wskaźnik umieralności zwierząt eksprymujących EpA960. RNA. Najpierw sprawdziliśmy, czy hamowanie PKC poprawiłoby śmiertelność zwierząt transgenicznych EpA960 / MCM indukowanych w celu ekspresji EpA960. RNA w sercu. Aktywacja PKC jest wykrywalna przez 6 godzin po indukcji RNA (17). Aby zapobiec wczesnej aktywacji PKC, Ro-31-8220 podano 2 godziny po wstrzyknięciu tamoksyfenu i kontynuowano codziennie przez 24 dni. Jako próbną kontrolę indukowane tamoksyfenem myszy EpA960 / MCM codziennie otrzymywały roztwór soli fizjologicznej przez 24 dni. Osiemdziesiąt procent myszy pozornie leczonych zmarło w ciągu 3 tygodni od indukcji RNA, jak podano wcześniej, z powodu arytmii i / lub dysfunkcji kurczliwości (Figura 1A, odnośnik 21 i patrz poniżej). Uderzająco, podawanie Ro-31-8220 zmniejszyło śmiertelność myszy bitransgenicznych do mniej niż 20% i nie miało wpływu na przeżycie myszy kontrolnych (MCM) traktowanych tamoksyfenem (Figura 1A). Figura Hamowanie PKK poprawia wskaźnik śmiertelności myszy eksprymujących EpA960. RNA. (A) Krzywa przeżycia Kaplan-Meier na zwierzętach otrzymujących inhibitor PKC, Ro-31-8220. Procentowe przeżycie myszy EpA960 / MCM indukowanych tamoksyfenem leczonych Ro-31-8220 (EpA960 / MCM, TAM-R-31-8220) lub pozornie wstrzyknięto za pomocą soli fizjologicznej (EpA960 / MCM, TAM), w porównaniu z myszami kontrolnymi, tylko eksprymujące Cre leczony tamoksyfenem i Ro-31-8220 (MCM, TAM-RO-31-8220). (B) Ekspresję EpA960. RNA po rekombinacji za pośrednictwem Cre u myszy indukowanych TAM, z podaniem Ro-31-8220 (TAM-Ro-31-8220) lub soli fizjologicznej (TAM) analizowano za pomocą ilościowego RT-PCR przy użyciu TaqMan ( średni. SEM). (C) stosunek HW / BW myszy z każdej grupy (średnia . SEM). * P <0,05 względem sterowania MCM. Aby określić, czy Ro-31-8220 wpływa na ekspresję EpA960. RNA w sercu, wykorzystaliśmy TaąMan RT-PCR w czasie rzeczywistym do określenia poziomu zrekombinowanego allelu. Stwierdziliśmy, że zwierzęta, którym podawano Ro-31-8220, wykazywały porównywalne poziomy EpA960 (R) RNA ze zwierzętami pozorowanymi (Figura 1B). Zgodnie z tym wynikiem liczba i rozkład jądrowych ognisk RNA była porównywalna dla zwierząt, które otrzymały Ro-31-8220 lub sól fizjologiczną (dane nie pokazane). Wyniki te wskazują, że Ro-31-8220 nie zmniejsza ekspresji EpA960 (R) RNA, ale raczej blokuje jego patogenne działanie. Myszy eksprymujące EpA960. RNA wykazywały wyższy stosunek masy ciała do masy ciała (HW / BW) w porównaniu z kontrolnymi myszami MCM, zgodnie z kardiomiopatią obserwowaną u tych myszy (21). [przypisy: filet z łososia na patelni, krem ziaja liście manuka, alzheimer pierwsze objawy ] [hasła pokrewne: masc ochronna z wit a, tormed lubliniec, laremid ulotka ]