Glioksalaza 1 zwiększa lęk poprzez redukcję agonisty metyloglioksalu receptora GABAA czesc 4

Aby przetestować tę hipotezę, badaliśmy elektrofizjologiczne działanie MG na pierwotnych neuronach granulocytów móżdżku (CGN), wykorzystując rejestrację prądowo-zaciskową do oceny potencjału błony neuronowej (Vm) i rejestracji napięcia na zaciskach w celu pomiaru prądów jonowych. W trybie cęgów prądowych w całej komórce, zastosowanie zewnątrzkomórkowe MG szybko depolaryzowanych CGN w sposób zależny od stężenia (Figura 5A). Po początkowej, szybkiej depolaryzacji następowała repolaryzacja Vm. W trybie pełnokomórkowej napięciowo-napięciowym zastosowanie MG wytwarzało prądy wewnętrzne przy ujemnych potencjałach membranowych, charakterystycznych dla Cl. aktywacja kanału w naszych warunkach nagrywania (rysunek 5B). Prąd wywołany przez MG szybko się zmniejszył (Figura 5B), zgodnie z aktywacją i desensytyzacją bramkowanych ligandem kanałów jonowych. Te efekty elektrofizjologiczne były podobne do tych wywołanych przez zastosowanie GABA (Figura 5, A i B). Gęstość prądu była zależna od stężenia i miała charakter podobny do tego wywołanego przez GABA, podczas gdy amplituda względna wynosiła w przybliżeniu jedną trzecią GABA. Aby ustalić, że MG działa na receptory GABAA, odpowiedzi badano w obecności selektywnego antagonisty receptora GABAA SR-95531 (SR). SR hamował ponad 95% Vm (Figura 5C) i zmiany gęstości prądu (Figura 5D) indukowane przez MG i GABA. Figura 5MG jest agonistą receptora GABAA w CGNs. (A) CGN depolaryzowane są przez MG (białe kółka) lub GABA (czarne kółka) (EC50, 10,5. 0,5. M MG, współczynnik Hill, 1,17). Względna amplituda depolaryzacji jest znormalizowana do odpowiedzi każdej komórki na 100. M MG. (B) MG wywołuje prądy wewnętrzne w sposób zależny od stężenia (EC50, 12. 0,7. M, współczynnik Hilla, 1,13). Przedstawiono amplitudę prądów znormalizowanych do szczytowej odpowiedzi każdej komórki (I / Imax). (C) Depolaryzacja wywołana przez 10 .M MG (po lewej) lub GABA (w środku) została zablokowana przez 10 .M SR. Dane średnie są drukowane jako histogram (po prawej). (D) Prądy wewnętrzne wywołane przez 10. M MG (po lewej) lub GABA (w środku) były również blokowane przez 10. M SR. Dane średnie są drukowane jako histogram (po prawej). (E) Prądy wywołane przez 100. M GABA zostały zredukowane przez podanie MG (po lewej). Pręty skali: 200 pA / pF, 25 s. Średnie dane są znormalizowane do prądu wywołanego przez 100. M GABA w każdej komórce (po prawej). (F) Prądy obserwowane około 40 sekund po zastosowaniu 10 .M MG do wnętrza macropatów wyciętych z CGN były blokowane, gdy 10 .M SR było zawarte w pipecie. Zastosowanie 10. M GABA do wnętrza macropatches nie wywołało prądu. Średnie dane są drukowane jako histogram. Pasek nad każdym śladem pokazuje czas stosowania leku. Dane są średnie. SEM. n = 6. 12 komórek lub makropatches na stan. Następnie ustaliliśmy, że efekty elektrofizjologiczne MG były specyficzne dla aktywacji receptora GABAA. MG nie wpływało na główne prądy sodu (dodatkowa postać 8A) lub prądy potasowe (dodatkowa postać 8, B i D. F) w CGN. Ponadto, MG nie aktywował receptorów GABAB (dodatkowa Figura 8C), receptorów glicyny (dodatkowa Figura 8G) lub receptorów glutaminianu (dodatkowa Figura 8, H i I). Wyniki te łącznie pokazują, że aktywacja receptorów GABAA jest zarówno konieczna, jak i wystarczająca dla aktywności elektrofizjologicznej MG. Porównano również podstawowe właściwości elektrofizjologiczne CGN hodowanych z myszy WT i Tg. Neurony z myszy Tg były bardziej pobudliwe, wyświetlając zmniejszony prąd przecieku potasu (IKso), depolaryzowaną Vm i zwiększoną oporność wejściową na poziomie komórkowym (Suplementalna Figura 9). MG jest konkurencyjnym częściowym agonistą receptorów GABAA. Następnie zbadaliśmy, czy MG działa w sposób konkurencyjny lub niekonkurencyjnie z GABA. Aby to zrobić, zastosowaliśmy MG i GABA do CGN w stężeniu 100 | jM, stężenia, które nasycają odpowiedź receptora GABAA (Figura 5B), wskazując, że miejsca wiązania są maksymalnie zajęte. Zgodnie z danymi przedstawionymi na Figurze 5B, 100 .M MG aktywowało prąd jednej trzeciej wielkości tego, co wywołało 100 .M GABA. W przeciwieństwie do tego, zastosowanie 100. M MG i 100. M GABA aktywowało prąd około 60% wielkości wywołanej samym 100. M GABA (Figura 5E). Frakcja maksymalnego prądu wywołana przez podanie MG i GABA wzrosła wraz ze zmniejszeniem stężenia MG (Figura 5E). Te odkrycia sugerują, że MG jest częściowym agonistą receptorów GABAA i konkuruje z GABA o to samo miejsce wiązania. MG dyfunduje przez błonę plazmatyczną, aktywując receptory GABAA. Endogenne MG jest generowane wewnątrzkomórkowo; w związku z tym zbadaliśmy wewnątrzkomórkowe działanie MG na receptory GABAA za pomocą makropatches membrany plazmowej (PM)
[więcej w: sennik koleżanka z pracy, moczówka prosta u psa, linka treningowa dla psa ]
[hasła pokrewne: najsmieszniejsze nazwiska, pro kolin, sinulan ulotka ]