Glioksalaza 1 zwiększa lęk poprzez redukcję agonisty metyloglioksalu receptora GABAA ad 8

Nasze dane jednoznacznie potwierdzają hipotezę, że zwiększona ekspresja Glo1 powoduje nasilone zachowania podobne do lęku i jest wzmocniona przez wykorzystanie tła izogenicznego. Niniejsze badanie może również dostarczyć mechanistycznego wglądu w proponowane przez GLO1 as powiązania z innymi chorobami OUN, takimi jak autyzm (48, 49), zaburzenia afektywne (50, 51), zaburzenie lękowe (52) i schizofrenia (53). Badania asocjacyjne całego genomu człowieka wykazały związek pomiędzy zespołem niespokojnych nóg (RLS) a haplotypem zawierającym GLO1 (54, 55). Nasze wyniki sugerują, że rola GLO1 w sygnalizacji GABAergicznej może leżeć u podstaw jej powiązania z RLS. Rzeczywiście, agoniści receptora GABAA są stosowani do leczenia RLS (56). Na koniec ustaliliśmy, że GLO1 jest celem leczenia zaburzeń lękowych i wykazuje działanie anksjolityczne inhibitora GLO1. Podobne leki mogą być przydatne w leczeniu stanów lękowych i innych chorób związanych z sygnalizowaniem GABA, w tym padaczki i zaburzeń snu (57, 58). Metody Szczegółowe metody zostały podane w Dodatkowych metodach. Zwierząt. Testy behawioralne zastosowały myszy płci męskiej w wieku 7- do 10 tygodni. Do eksperymentów farmakologicznych myszy B6 otrzymano z The Jackson Laboratory. Do badań z myszami Tg testowano równolegle myszy z miotami WT i Tg. Myszy WT z każdej linii nie różniły się znacząco i były łączone. Myszy BAC Tg. Mysz BAC RP23-247F19 otrzymano z Children s Hospital Oakland Research Institute i zmodyfikowano metodą rekombinacji RED / ET (13). Zmodyfikowany BAC oczyszczono i wstrzyknięto do przedjądrza B6 lub FVB przez Transgeniczną Bazę Podstawową University of Chicago. W związku z tym założyciele Tg uzyskali na czystym podłożu B6 lub FVB. Numer egzemplarza BAC. Genomowy DNA zastosowano w qPCR z odczynnikami SYBR (Applied Biosystems). Startery skierowały Glo1 i region Btbd9 poza region BAC. ekspresja mRNA. MRNA Glo1 mierzono jak opisano wcześniej przez qPCR z odczynnikami SYBR (Applied Biosystems) (2). Ekspresję Glo1 znormalizowano względem Actb i przedstawiono jako zmianę krotności w stosunku do WT (59). Dane mikromacierzy. Dane mikromacierzy są dostępne w GEO (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/) pod numerem dostępu GSE36819. Immunoblot. Dwadzieścia. G całkowitego białka oddzielono za pomocą SDS-PAGE. Błony sondowano pierwszorzędowymi przeciwciałami przeciwko Glo1 (dar od Iiris Hovatta, University of Helsinki, Helsinki, Finland) i GAPDH (Cell Signaling Technology). Następnie użyto wtórnych przeciwciał skoniugowanych z peroksydazą (Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.). Bloty opracowano za pomocą Pierce ECL Plus (Thermo Fisher Scientific), poddano cyfryzacji, a intensywność pasma zmierzono metodą densytometrii. Testu. Test OF został przeprowadzony zgodnie z wcześniejszym opisem (2). Środek o wymiarach 18 x 18 cm. Aktywność enzymatyczna. Aktywność Glo1 badano przez pomiar szybkości tworzenia Sd-laktoiloglutationu, jak opisano wcześniej (60). HPLC. Stężenie MG mierzono za pomocą HPLC, jak opisano wcześniej (61), z modyfikacjami. Farmakologia MG. MG otrzymano z Sigma-Aldrich, sterylizowano przez filtr (filtr 0,22 .m, Millipore), rozcieńczono w nośniku (0,9% NaCl) i doprowadzono do pH około 7,4. Myszom wstrzyknięto ip 10 ml / kg MG lub nośnik. Elektrofizjologia. Nagrania przeprowadzono w pierwotnych hodowlach CGN lub HNs po 6 do 9 dniach w hodowli. HN były prezentem od Suzanne Paradis (Brandeis University). Analizę patch-clamp dla całych komórek przeprowadzono zgodnie z wcześniejszym opisem (62). Nagrywanie Macropatch przeprowadzono z 1,5 do 2 M. elektrody wypełnione roztworem do kąpieli. Wnętrze wyciętych plastrów perfundowano roztworem elektrod zawierającym wskazane odczynniki. Inhibitor Glo1. BrBzGCp2 przygotowano jak opisano uprzednio (31, 32), z modyfikacjami. BryBzGCp2 rozpuszczono w zaróbce (8% DMSO i 18% Tween-80). Myszy traktowano ip 10 ml / kg BrBzGCp2 lub podłożem. Statystyka. Wszystkie analizy statystyczne zostały przeprowadzone przy użyciu StatView dla Windows (SAS Institute Inc.), o ile nie zaznaczono inaczej. Normalnie rozproszone dane analizowano za pomocą testów t lub ANOVA, odpowiednio. Testy t były dwukierunkowe, o ile nie zaznaczono inaczej. Testy post-hoc wykorzystano do określenia istotnych różnic między grupami, gdy ANOVA dała znaczący wynik. Dla danych, które nie były normalnie dystrybuowane, użyto testu U Manna-Whitneya. W metaanalizie anksjolitycznego działania MG, wyniki indywidualnych doświadczeń zostały zebrane i przeanalizowane przy pomocy oprogramowania MIX 1.7 przy użyciu modelu efektów stałych (63). W przypadku wszystkich testów P <0,05 uznano za statystycznie istotny. Legendy liczb wskazują konkretne zastosowane testy i ich odpowiednie wartości P W celu analizy statystycznej danych z mikromacierzy, wartości P przekształcono do wartości q za pomocą oprogramowania wartości Q (64), a q <0,05 uznano za statystycznie istotne. Zatwierdzenie badania. Wszystkie procedury z udziałem myszy zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Stosowania na Uniwersytecie w Chicago. Materiały uzupełniające Zobacz Uzupełniające dane PodziękowaniaTa praca została sfinansowana przez granty NIH R01MH079103 i R01DA021336 oraz Centrum Badawczo-Szkoleniowe na Uniwersytecie w Chicago przyznające P60 DK020595 (firmie AA Palmer). MG Distler był wspierany przez grant NIH T32GM07281. LD Plant był wspierany przez grant NIH R01NS058505 (przyznawany S. Goldstein). Dziękujemy Linda Degenstein za wstrzyknięcie przedjądrzykowe, Peter Pytel za analizę histologiczną, Human Tissue Resource Center na University of Chicago za wykonanie barwienia TUNEL, oraz Stephanie Dulawa, Steve Goldstein, Jason MacLean, Kathy Millen, Gopal Thinakaran, William Zeiger i Xiaoxi Zhuang za ich opinie naukowe i opinie. Przypisy Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Informacje referencyjne: J Clin Invest. 2012; 122 (6): 2306. 2315. doi: 10,1172 / JCI61319. [patrz też: przyczyny suchego kaszlu, przychodnia góra kalwaria, refluks u dziecka objawy ] [hasła pokrewne: chitinin extra, kolmed międzylesie, aglan cena ]