Droga insuliny / Akt kontroluje specyficzny program podziału komórek, który prowadzi do tworzenia dwujądrowych tetraploidalnych komórek wątroby u gryzoni. ad

Rzeczywiście, jeśli ten hepatocyt ponownie się rozdzieli, zostanie wytworzone jednojądrzaste tetraploidalne potomstwo. Zgodnie z naszą wiedzą, mechanizm sygnalizacji komórkowej, który kontroluje program zniszczenia cytokinezy i prowadzi do wytworzenia dwujądrowej tetraploidalnej komórki wątroby, nie został wcześniej wyjaśniony. W raporcie tym wykazaliśmy, że szlak PI3K / Akt, w dół od sygnalizacji insuliny, kontrolował ten specyficzny program podziału, a zatem wytwarzanie dwujądrowych tetraploidalnych komórek wątroby. Wyniki Generowanie dwujądrowych tetraploidalnych hepatocytów jest kontrolowane przez przejście od ssania do odsadzenia. W pierwszej kolejności zbadaliśmy udział odstawiania zwierząt w kontrolowaniu zdarzeń związanych z niewydolnością cytokinzy, analizując zdarzenia mitozowe w tkankach wątroby (ryc. 1A). Gdy hepatocyty zakończyły cytokinezy, powstała szczególna struktura mikrotubuli, zwana midbody, a komórka przyjęła kształt charakterystyczny dla wbijania bruzd. W przeciwieństwie do tego, gdy hepatocyty nie zakończyły cytokinezy, sieci mikrotubul były wyraźnie zdezorganizowane, a wnikanie w błonę było nieobecne. U szczurów odstawionych od matki w wieku 19 dni i karmionych dietą bogatą w węglowodany przez 4 dni (Figura 1B), zaobserwowaliśmy, że duża część dzielących się hepatocytów nie zakończyła cytokinezy (43,0%. 0,8%, Figura 1C i odnośnik 22). U szczurów ssących do 19 dni większość hepatocytów zakończyła cytokinezy, podczas gdy u ich miotów odsadzonych od matki w wieku 15 dni i karmionych dietą bogatą w węglowodany do 19 dni, już 36,9%. 5,2% hepatocytów nie ukończyło cytokinezy (ryc. 1C). Tak więc, powszechna awaria cytokinezy w hepatocytach i wynikające z tego wytwarzanie dwujądrowych komórek tetraploidalnych była kontrolowana przez przejście od ssania do odsadzenia. Rycina Defibrylacja jest wywołana przez przejście od ssania do odsadzenia. (A) Immunowe barwienie skrawków wątroby za pomocą a-kateniny (znakowanie błoną plazmatyczną) i a-tubuliny (znakowanie mikrotubulami). Obrazy telofazy wizualizowano jako skondensowane barwienie chromatyną (Hoechst 33342). Immunobarwienie pozwoliło odróżnić telofazy, które zakończyły cytokinezy, od tych, które tego nie zrobiły. Pasek skali: 10 .m. (B) Po lewej: szczury z tego samego miotu były odstawiane od piersi w wieku 15 dni i karmione dietą bogatą w węglowodany lub pozostawione z matką bez dostępu do stałego pokarmu. Wszystkie szczury uśmiercono w wieku 19 dni. Z prawej: szczury z jednego miotu zostały odstawione od matki w wieku 19 dni, karmione dietą bogatą w węglowodany i uśmiercone w dniu 23. (C) Cytokinezy w 19-dniowym karmieniu oraz w 19- i 23-dniowych odsadzonych szczurach, jak w B Wartości procentowe prawidłowej cytokinyzy i defektu cytokinzy obliczono przez analizę. -Kenceniny,. -Tubuliny i Hoechst immunobarwienia na skrawkach tkanek. Dla każdego zwierzęcia analizowano 50 telofaz. Wyniki to środki. SEM (n = 6 na grupę). * P <0,05. Codzienne rytmy i zaopatrzenie w węglowodany nie wpływają na proces tetraploidalny. Przejście od ssania do odsadzenia wiąże się z modyfikacjami różnych procesów fizjologicznych, zarówno odżywczych, jak i hormonalnych (23). Zwierzęta karmione mlekiem matki są na diecie niskowęglowodanowej, wysokotłuszczowej (mleko matki), a po odsadzeniu przechodzą na dietę bogatą w węglowodany o niskiej zawartości tłuszczu. Równolegle obserwuje się duże zmiany w stężeniu hormonów krążących, takich jak glukagon i insulina; odpowiednio są one wysokie i niskie podczas ssania i odwrotnie po odsadzeniu. Ponadto, podczas tej fizjologicznej przemiany stopniowo pojawiają się codzienne rytmy. W wątrobie synteza DNA i indeks mitotyczny są skorelowane z okresem dobowym (24, 25). Dlatego przetestowaliśmy, czy jeden lub kilka z tych parametrów kontroluje tetraploidyzację wątroby. Najpierw ocenialiśmy, czy modulacja codziennych rytmów wpłynęła na generowanie dwujądrowych tetraploidalnych hepatocytów przez modyfikację dziennego cyklu światło / ciemność przez tydzień po odsadzeniu (Figura 2A). Na tym etapie rozwoju wątroby proces tetraploidyzacji jest już mocno zaangażowany (21). W celu odróżnienia diploidalnych i tetraploidalnych frakcji użyliśmy jednoczesnego immunolabelingu membran jądrowych i plazmatycznych w tkankach (ryc. 2B). Zaburzenia rytmu dobowego nie wpływały na wytwarzanie dwujądrowych tetraploidalnych hepatocytów (Figura 2C). Ryc. 2 Wpływ zegara okołodobowego na proces tetraploidalny. (A) Szczury zostały odstawione od matki w wieku 19 dni i karmione dietą bogatą w węglowodany; osoby z tego samego miotu przydzielono do cykli jasnych / ciemnych o 12:12, 18: 6 lub 21: 3 godzin. Wszystkie szczury otrzymywały dietę bogatą w węglowodany i zostały uśmiercone w 25 dniu życia. (B) Obraz przekroju tkanki po dwukrotnym barwieniu za pomocą a-kateniny i Hoechst, ilustrujący różnicę między diploidalnym i tetraploidalnym hepatocytami [patrz też: filet z łososia na patelni, koktajl spalający tłuszcz, najśmieszniejsze nazwiska w polsce ] [podobne: trosicam 15 mg, najsmieszniejsze nazwiska, pro kolin ]