Dekarboksylaza ornityny jest celem chemoprewencji raków podstawnokomórkowych i płaskonabłonkowych w Ptch1 + / myszy cd

Całkowity komórkowy RNA wyizolowano ze skóry kontrolnej i BCC, jak opisano wcześniej. RT-PCR przeprowadzono przy użyciu zestawu Promega A-1260 (Promega Corp., Madison, Wisconsin, USA) zgodnie z protokołem dostawcy. Wykaz starterów stosowanych do oceny ekspresji genów szlaku SHH w skórze i wywołanych UVB guzach u myszy TchN Ptch1 + / A / ODC przedstawiono w Tabeli 1. Tabela Granice stosowane do oceny ekspresji genów szlaku SHH. Metody punktacji częstość występowania i różnorodność nowotworów, barwienie H & E, analiza immunohistochemiczna białek Gli1, Ptch, bioder, cykliny D1 i PCNA, przygotowanie lizatu tkankowego, analiza Western blot i pomiar aktywności ODC i poziomów poliamin były takie same jak opublikowane wcześniej (16, 20, 21, 27, 31, 32). Eksperymentalny protokół. Aby zbadać wpływ nadekspresji ODC na indukcję BCC przez UVB w Ptch1 + /. myszy, siedem z 14 myszy pierwszej generacji Ptch1 + / A / ODC TgN było napromieniowanych UVB (180 mJ / cm2 dwa razy w tygodniu przez 30 tygodni, począwszy od 8 tygodnia), a pozostałe siedem było napromienianych pozornie i służyło jako kontrola. Pod koniec 30 tygodni wszystkie zwierzęta zostały zabite; ich skórę grzbietową wycięto, pocięto na małe kawałki za pomocą chirurgicznych nożyczek i stosowano do barwienia a-galu, histologii, immunohistochemii i preparatów naskórkowych do RT-PCR. Dawka 180 mJ / cm2 została wybrana, ponieważ z naszego doświadczenia wynika, że jest ona stale nowotworowa u bezwłosych myszy SKH-1 (33). Aby ocenić wpływ wyczerpania tkanek ODC i poliamin na BCC indukowane UVB, użyliśmy Ptch1 + /. myszy z nadekspresją AZ, jak również ich mioty, które zawierały Ptch1 + / p, Ptch1 + / + i Ptch1 + / + / AZ myszy generowane przez krzyżowanie myszy K6-AZ z naszym Ptc1 + /. myszy. Te cztery grupy myszy (dziesięć myszy w każdej grupie) napromieniano UVB (240 mJ / cm2 trzy razy na tydzień przez 37 tygodni), a dane dotyczące nowotworu rejestrowano co tydzień. Dawka 240 mJ / cm2 UVB jest oparta na wcześniej opublikowanych badaniach wykazujących, że ta dawka jest wystarczająca do wywołania zarówno mikroskopijnych, jak i widocznych guzów w Ptch1 + /. myszy (16). Po 37 tygodniach wszystkie zwierzęta zostały zabite; ich skórę grzbietową wycięto, pocięto na małe kawałki i stosowano do barwienia a-galu, badania histologicznego, immunohistochemii i przygotowania lizatów pełnej skóry do oznaczania poziomów poliamin i aktywności ODC. Aby zbadać, czy farmakologiczne hamowanie ODC może zmniejszyć wzrost BCC indukowanych UVB, użyliśmy P-difluorometylornityny (DFMO), znanego silnego inhibitora ODC (34), i podawano go na napromieniowane PtB1 +. myszy. W tym eksperymencie 60 Ptch1 + /. myszy napromieniano UVB (240 mJ / cm2 trzy razy na tydzień) przez 32 tygodnie. Następnie promieniowanie UVB przerwano, a zwierzęta z nowotworem podzielono na dwie grupy po 20 sztuk każda w taki sposób, że początkowo każda grupa miała w przybliżeniu taką samą liczbę guzów. Nie stosowano myszy napromienianych promieniowaniem UVB nie obciążonych nowotworem. Zwierzętom grupy podawano zwykłą wodę pitną przez następne 20 tygodni, podczas gdy myszy grupy 2 otrzymywały 1% DFMO w wodzie do picia. Dane dotyczące nowotworu rejestrowano co tydzień i nanoszono na wykres w postaci liczby guzów na mysz w zależności od tygodni leczenia. Myszy uśmiercono po 52 tygodniach, usunięto ich grzbietową skórę, a guzy zebrano i zebrano do analizy Western blot, RT-PCR,. -Gal oraz histologicznych i immunohistochemicznych. Wyniki Badania w Ptch1 + /. myszy heterozygotyczne z nadekspresją ODC Ptch1 + /. myszy heterozygotyczne z nadekspresją ODC. Wygenerowaliśmy Ptch1 + /. myszy ekspresjonujące transgen K6-ODC, określany dalej jako Ptch1 + / A / ODC TgN. Użyto czternaście myszy Ptch1 + / A / ODC TgN (w tym zarówno samców, jak i samic). Nadekspresja ODC w Ptch1 + /. myszy dawały bezwłosy fenotyp podobny do transgenicznych zwierząt rodzicielskich ODC (23, 35). Te myszy były urodzajne, ale mniejsze w masie urodzeniowej niż ich Ptch1 + /. nietransgeniczne rodzeństwo z miotu i wykazało nadmierny wzrost paznokci oraz normalny cykl pierwszego włosa, a następnie postępujące wypadanie włosów rozpoczynające się w wieku 2. 3 tygodnie. Wraz z wiekiem skóra objawiała się wyraźnym marszczeniem i fałdowaniem. Podobny do Ptch1 + /. myszy (Figura 1B), niektóre z tych zwierząt wykazywały nieprawidłowości rozwojowe (Figura 1D), w tym deformacje czaszki. Skóra nieleczonych zwierząt była rażąco normalna. Jednak badanie histologiczne skóry wykazało niewielkie zmiany basaloidowe (dane niepokazane). Badania immunohistochemiczne tych skrawków potwierdziły, że te zmiany podobne do BCC barwią się pozytywnie na Gli1, (3-galu i biodrze (danych nie pokazano). Żadna z Ptch1 + / + K6-ODC lub Ptch1 + /. nietransgeniczni mioty wykazali takie zmiany lub wykazywali pozytywne wybarwienie dla a-galu. Figury 1Ptch1 + / + myszy heterozygotyczne z nadekspresją ODC (myszy TchN Ptch1 + / A / ODC)
[przypisy: przerost mięśnia sercowego, moczówka prosta u psa, nfz warszawa leczenie uzdrowiskowe ]
[więcej w: afobam działanie, damar ruda śląska, aceklofenak ]