Dekarboksylaza ornityny jest celem chemoprewencji raków podstawnokomórkowych i płaskonabłonkowych w Ptch1 + / myszy ad

Nie jest jasne, czy te mechanizmy promocji nowotworu, które są istotne dla indukcji SCC, są istotne dla BCC, chociaż, jak wspomniano wcześniej, aktywność ODC zwiększa się w BCC (20, 26, 27). Komórkowa zawartość poliaminy jest ściśle regulowana przez różne mechanizmy, w tym transkrypcyjną, translacyjną i posttranslacyjną regulację enzymów odpowiedzialnych za syntezę poliaminy i katabolizm, jak również wysoce indukowalny system transportu poliaminy (18, 28). Wielofunkcyjne białko znane jako antybiotyk (AZ) wywiera posttranslacyjną kontrolę ODC (29, 30). Nadekspresja AZ w skórze transgenicznych myszy z elementami promotora keratyny 5 (K5) lub keratyny 6 (K6) prowadzi do zmniejszenia aktywności ODC i zawartości poliaminy po podaniu skórnym promotorów nowotworowych (31). W tym badaniu oceniliśmy ODC jako cel molekularny dla chemoprewencji BCC. Nadekspresja ODC w Ptch1 + /. myszy zwiększyły indukcję UVB BCC, podczas gdy inhibicja ODC zarówno genetycznie, jak i farmakologicznie zmniejszyła BCC indukowane UVB, co wskazuje, że strategie chemoprewencji skierowane przeciwko ODC i komórkowym poliaminom mogłyby być użyteczne w zmniejszaniu ryzyka BCC w ludzkich populacjach. Metody Odczynniki. Antybiotyko królika AZ produkowano w Cocalico Biologicals Inc. (Reamstown, Pensylwania, USA) stosując oczyszczone białko fuzyjne AZ z oznaczeniem polihistydynowym (31) i dalej oczyszczano na kolumnie powinowactwa 6xHis-AZ (zestaw do immobilizacji AminoLink Plus; Pierce Biotechnology Inc. , Rockford, Illinois, USA). Ponadto, komercyjnie uzyskane przeciwciała zastosowano do analizy Western blot i / lub immunohistochemii z użyciem dostawców. protokoły. Przeciwciała dla cyklin A / D1, Gli1, Ptch1 i Hip zakupiono z Santa Cruz Biotech Inc. (Santa Cruz, Kalifornia, USA), przeciwciała przeciwko cyklinie B1 i anty-K17 z NeoMarkers (Fremont, Kalifornia, USA), przeciw Przeciwciało-PCNA z Oncogene (Boston, Massachusetts, USA) i przeciwciało anty-ODC z Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, USA). Przeciwciało anty-AZ było darem od Anthony ego Pegga. Zwierząt. Ptch1 + /. heterozygotyczne nokauty myszy C57BL / 6 wytworzono przez delecję eksonów i 2 i wstawienie genu LacZ w miejscu delecji, jak opisano wcześniej (15, 16). Zakupiliśmy hodowców płci męskiej (6. 7 tygodni) hemizygotycznego transgenicznego szczepu B6.Cg-Tg (K6-Odc) ODT (Taconic, Germantown, New York, USA). Transgeniczne myszy z bydlęcym promotorem cytokeratyny 6 kierujące ekspresją AZ w skórze uzyskano jak opisano wcześniej (31). Przedstawione tu badania wykorzystywały myszy z transgenem K6-AZ linii 52 na B6C3F2 wstecznie krzyżowanym na szczepie wsobnym C57BL / 6J przez siedem pokoleń lub więcej (31). Szczegółowe protokoły hodowlane i genotypowanie Ptch1 + /. heterozygotyczne transgeniczne ODC i Ptch1 + /. heterozygotyczne zwierzęta transgeniczne ODC AZ opisano wcześniej (15, 31). Eksperymenty na zwierzętach przeprowadzono przy użyciu protokołów zatwierdzonych przez instytucjonalną komisję odwoławczą. Źródło światła UV. Jednostka promieniowania UV (Daavlin Co., Bryan, Ohio, USA) wyposażona w kontroler elektroniczny do regulowania dawki była rutynowo stosowana do tych badań. Źródło UVB składało się z ośmiu lamp FS72T12-UVB-HO emitujących promieniowanie UVB (290 ÷ 320 nm, 75 . 80% całkowitej energii) i ultrafioletu A (320 ÷ 380 nm, 20 ÷ 25% całkowitej energii). Zastosowaliśmy folię celulozową (Kodacel TA401 / 407) (Eastman Kodak Co., Rochester, Nowy Jork, USA) w celu wyeliminowania promieniowania ultrafioletowego C (UVC). Podczas każdej ekspozycji wykorzystano czujnik UVC (sonda Goldilux UVC, Thermo Oriel, Stratford, Connecticut, USA), aby potwierdzić brak emisji UVC. Dawkę UVB oznaczono ilościowo przy użyciu dozymetru UVB Spectra 305 (Daavlin Co.). Promieniowanie zostało dodatkowo skalibrowane za pomocą radiometru / fotometru badawczego IL1700 firmy International Light Inc. (Newburyport, Massachusetts, USA). Odległość między źródłem promieniowania a celami została utrzymana na 30 cm. Zespół napromieniowania przechowywano w klimatyzowanym pomieszczeniu, a wentylator umieszczano w komorze ekspozycyjnej, aby zminimalizować wahania temperatury podczas napromieniania, jak opisano wcześniej (32). Ocena zmian mikroskopowych. Mikroskopowe zmiany typu BCC zdefiniowano jako wyspy nowotworowe składające się z monomorficznych komórek basaloidów o niewielkiej cytoplazmie rozmieszczonych w gniazdach w skórze właściwej. Zmiany te były liczone jako liczby na jednostkę powierzchni, a także jako całkowita powierzchnia guza na milimetr kwadratowy sekcji skóry. Próbki skóry przygotowano z użyciem 10% zbuforowanej formaliny – utrwalone zabarwione H & E i próbki poplamione a-galem pełnej skóry grzbietowej pełnej grubości. W celu wybarwienia a-galu, aldehyd glutarowy i utrwaloną w formalinie tkankę potraktowano X-galem i roztworem buforującym żelazo (Roche Diagnostics Corp., Indianapolis, Indiana, USA) przez 48 godzin i przetworzono stosując protokół producenta. Izolacja RNA i RT-PCR
[przypisy: aglan cena, krem ziaja liście manuka, żel do mycia twarzy bioliq ]
[więcej w: chitinin extra, kolmed międzylesie, aglan cena ]